RHODOTORULA SP. CRUB0138, UNA LEVADURA CAROTENOGENICA DE UN LAGO DE ALTURA DE LA PATAGONIA NOROCCIDENTAL

LIBKIND FRATI, D; BRIZZIO, S; RUFFINI, A; VAN BROOCK, MR

Taffi del Valle, Tucumán

Jornada; XIX Jornadas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2002

Una cepa del género Rhodotorula (CRUB0138), aislada de muestras de agua de un lago localizado a 2000 m.s.n.m. en la Patagonia Noroccidental, identificada preliminarmente como Rh. lactosa (Brizzio & van Broock, 1998) y seleccionada por el intenso color salmón de sus colonias fue sometida a estudios de taxonomía polifásica y de producción de pigmentos carotenoides. La caracterización morfológica y celular se realizó mediante microscopía óptica y electrónica de barrido. Se realizaron 70 pruebas fisiológicas y bioquímicas tradicionales de asimilación incluyendo ácidos aldáricos y compuestos aromáticos de valor taxonómico. Se llevaron a cabo 40 pruebas adicionales de producción de enzimas extracelulares (proteasas, aminopeptidasas, polisacarasas, ARNsas, lipasas, pectinasas, fenoloxidasas y capacidad celulolítica), asimilación de distintos aminoácidos y producción de pigmentos extracelulares en medio sólido a partir de diversos precursores. Para su caracterización molecular se utilizó la técnica de Micro/Minisatélites (MSP-PCR fingerprinting), aplicando separadamente tres primers: (GTG)5, M13 y (GAC)5. Se calcularon los índices de similitud entre CRUB0138 y la cepa tipo de Rh. mucilaginosaPYCC5166 mediante taxonomía numérica. A fin de estimar la posible importancia biotecnológica de la cepa CRUB0138, se realizaron estudios cinéticos preliminares de producción de biomasa, exopolisacáridos y pigmentos carotenoides en shaker New Brunswick INNOVA 4000 bajo condiciones controladas (50ml de medio sintético, pH 5, 25ºC, 250 rpm). Los tests fisiológicos, las pruebas adicionales y el PCR fingerprinting basado en 3 primers indicaron los siguientes grados de similitud entre ambas cepas: 0.86, 0.82 y 0,77 (0,8 - (GTG)5, 0,82 - M13 y 0,67 - (GAC)5) respectivamente. Los máximos de producción de biomasa (48 hs) y pigmentos carotenoides (72 hs) totales fueron 4,28 g/L y 478 µg/g de biomasa seca respectivamente. No se detectaron exopolisacáridos en el sobrenadante de cultivo. El rendimiento de biomasa (Yx/s) fue 0.41 y la velocidad media de crecimiento (k) fue 0,1. Los resultados obtenidos confirman la asignación preliminar de la cepa CRUB0138 al género Rhodotorula y la reasignan a la especie mucilaginosa. En base a los caracteres estudiados, la misma se asemeja a la cepa tipo (Rh. mucilaginosa PYCC5166) aproximadamente en un 80%. La aplicación del enfoque polifásico a la caracterización de levaduras de ambientes naturales permite su identificación correcta y dan lugar a clasificaciones taxonómicas más estables. La optimización de los parámetros de su cultivo en fermentador a escala de laboratorio se lleva a cabo en este laboratorio actualmente a fin de determinar su importancia biotecnológica.