OPTIMIZACIÓN DE LA TÉCNICA CITOGENÉTICA PARA EVALUACIÓN DE CULTIVOS DE CÉLULAS EPITELIALES DEL OVIDUCTO BOVINO

LÓPEZ MÁRQUEZ, FERNANDA MARÍA. ; ROLDÁN OLARTE, EM; MÓNACO, ME; VALDECANTOS, PA.

San Miguel de Tucuman, Tucuman, Argentina

Jornada; XV Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores ?Augusto Palavecino?; 2014

Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia, UNT

Los cultivos in vitro de células epiteliales del oviducto son utilizados para el estudio de sus funciones. Sin embargo, las células cultivadas en monocapas experimentan alteraciones morfológicas y funcionales, ingresando finalmente en un estado de senescencia replicativa. El objetivo de este trabajo fue optimizar el procedimiento de obtención de cromosomas en metafase de células epiteliales del oviducto bovino cultivadas in vitro. Se obtuvieron cultivos primarios de células epiteliales de la región del ámpula del oviducto de vaquillonas faenadas en frigorífico. El medio de cultivo utilizado fue TCM199 con sales de Earle, glutamina, suero fetal bovino 10%, ácido pirúvico 0,2 mM, antibióticos y antifúngico. Se incubó en estufa a 38,5 °C con 5% de CO2 y 100% de humedad. Una vez alcanzado el 70 - 80% de confluencia, se realizaron subcultivos en forma seriada hasta 4 pasajes. Las células en monocapa del cuarto pasaje se trataron con Colcemid a una concentración final de 0,1 ug/ml durante 3 h. Posteriormente se obtuvo una suspención de células desprendiéndolas del frasco de cultivo con una solución de tripsina 0,25% - EDTA 1 mM. Se centrifugó a 800 xg 5 min, se eliminó el sobrenadante y se añadieron 5 ml de solución hipotónica (KCl 75 mM), incubando durante 15 min a 37 °C. Las células se fijaron con metanol - ácido acético glacial 3:1. Gotas de la suspención de células fijadas fueron depositadas sobre portaobjetos para obtener metafases con buena morfología y dispersión cromosómica. Se estudiaron 20 metafases teñidas con Giemsa en los pasajes 1 y 4. En ambos casos se observaron cariotipos normales con el número diploide de cromosomas 2n=60 (29 pares de autosomas acrocéntricos y 1 par de cromosomas X). Esta técnica permitirá controlar alteraciones cromosómicas en cultivos de células epiteliales mantenidas a largo plazo.