Efecto de la activación e inhibición del sistema plasminógeno/ plasmina en la fecundación in vitro (FIV) de embriones bovinos

RIZO, GABRIELA; BARRERA, AD; GARCÍA, EV; MARIELA ROLDÁN OLARTE; JIMÉNEZ DÍAZ, MARÍA; DORA C. MICELI

Horco Molle, Tucumán

Jornada; XXX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2013

Asociación de Biología de Tucumán

Los componentes del sistema proteolítico extracelular Plasminógeno (Plg)/Plasmina (Plm) están presentes en los gametos y oviducto de mamíferos. En nuestro laboratorio se localizó el Plg en la zona pelúcida y membrana plasmática de ovocitos bovinos madurados in vitro (MIV). El Plg es enzimáticamente inactivo y al interactuar con sus activadores se convierte en Plm, involucrada en la proteólisis de la matriz extracelular. La Estreptoquinasa (SK) se une específicamente al Plg y actúa como activador exógeno generando Plm, mientras que el ácido ε amino caproico (EACA), actúa como un inhibidor exógeno y específico uniéndose a la Plm. El objetivo de este trabajo fue utilizar la SK y el EACA como estrategia biológica para estudiar la participación del sistema Plg/Plm durante la producción in vitro de embriones bovinos. Ovocitos obtenidos mediante punción aspiración de folículos, se maduraron in vitro en condiciones estándares. Para la FIV, pajuelas de semen bovino se lavaron por centrifugación en medio BO con heparina y cafeína y el pellet se resuspendió en BO con albúmina bovina. Se armaron gotas de inseminación de 100 ul y los COCs MIV se distribuyeron aleatoriamente. La FIV se llevó a cabo bajo 3 condiciones: a) control y suplementada con b) SK (3,5 UI/ml) ó c) EACA (10 mM). Luego de 5 h de incubación a 38,5 ºC 5% de CO2 y 100% de humedad, los presuntos cigotos se cultivaron in vitro en medio CR1aa durante 48 h en iguales condiciones. Se evaluó el porcentaje de segmentación y los embriones se transfirieron a medio CR1aa + 10% SFB para continuar el cultivo. El porcentaje de blastocistos se evaluó a los 7 y 8 días post inseminación. Se observó un aumento, con respecto al control, del porcentaje de segmentación en los embriones FIV con SK, pero este aumento no se vio reflejado en un aumento del porcentaje de blastocistos. Esto sugiere que la Plm intervendría durante la fecundación y participaría en el desarrollo de los cigotos hasta el estadio de 8 células. Por otro lado, la adición de EACA al medio FIV, produjo una disminución del porcentaje de segmentación, indicando que la inhibición de Plm tendría un efecto negativo sobre el desarrollo embrionario in vitro en bovinos.