EXPRESION DE GENES DEL SISTEMA DE ACTIVACIÓN DEL PLASMINOGENO EN CULTIVOS CELULARES PRIMARIOS TRIDIMENSIONALES DE OVIDUCTO BOVINO

AGOSTINA RUSSO MAENZA; GARCÍA, DANIELA; MARIELA ROLDÁN OLARTE

San Miguel de Tucumán

Jornada; XIII Jornadas Augusto Palavecino de Jóvenes Investigadores de la Fac. de Bioq., Qca. y Fcia.; 2012

Centro Único de Estudiantes de la Fac. de Bioq. Qca. y Fcia. de la UNT

El microambiente oviductal provee las condiciones óptimas para la fecundación y el inicio del desarrollo embrionario. Entre las moléculas que participan en estos procesos se encuentran los activadores del plasminógeno (APs) del tipo tisular (tPA) y tipo uroquinasa (uPA). Éstos interactúan con sus receptores, Anexina y uPAR, respectivamente, incrementando así su actividad; su acción es regulada por PAI-1 (inhibidor del activador del plasminógeno tipo 1). Los objetivos de este trabajo fueron evaluar la expresión de los genes uPA, uPAR, tPA, Anexina y PAI-1 en cultivos primarios de células oviductales bovinas a distintos tiempos de incubación y realizar una caracterización histológica de los explantes obtenidos. Se realizaron cultivos empleando células epiteliales de oviductos bovinos en medio 199 suplementado con suero fetal bovino, ácido pirúvico y antibióticos. Luego de 72 h, se tomaron muestras de los explantes a las 0, 12, 24 y 36 h, para la extracción de ARN total. Mediante RT-PCR semicuantitativa se analizó la expresión de los genes involucrados en el sistema, utilizando β-actina, como control de expresión constitutiva. Además se fijaron alícuotas de los explantes, en formaldehido al 4% tamponado, se incluyeron en paraplast, se realizaron cortes de 5 µm y se tiñeron con hematoxilina-eosina. La observación de los explantes luego de la tinción indica la presencia de células de aspecto epitelial que forman cultivos tridimensionales esferoidales formados por un monoestrato de células ciliadas y no ciliadas; en el interior se visualiza un espacio libre de células, probablemente constituido por componentes de secreción celular. Los niveles de expresión de los genes analizados se mantienen prácticamente invariables a los distintos tiempos estudiados, observándose un nivel de expresión similar entre tPA y Anexina, y entre uPA y uPAR. A su vez, PAI-1 se expresa también a lo largo del tiempo, pero en menor medida que los anteriores. Estos resultados son la base para estudiar la acción de moléculas inductoras de la expresión de genes del sistema de activación del plasminógeno en cultivos celulares.