Detección de BMP-5 en fluido oviductal bovino e interacción con ovocitos madurados in vitro

VANESA GARCÍA; PABLO A. VALDECANTOS; MARIELA ROLDÁN OLARTE; BARRERA, AD; GABRIELA RIZO; GARCÍA, DANIELA; DORA C. MICELI

Horco Molle, Tucumán

Jornada; XXIX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2012

Asociación de Biología de Tucumán

Las Proteínas Morfogenéticas Óseas (BMPs) participan en la reproducción de mamíferos interviniendo en el desarrollo folicular en el ovario, regulando la implantación en el útero y la morfogénesis y organogénesis durante el desarrollo embrionario. En estudios previos analizamos la expresión de BMPs en el oviducto bovino y detectamos que BMP-5 se expresa diferencialmente en el istmo. Con el fin de conocer si este factor es secretado a la luz del oviducto, el objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia de BMP-5 en el fluido oviductal bovino (FOb) y, dado que el ovocito expresa receptores para BMPs, estudiar su interacción con el ovocito. Se obtuvieron aparatos genitales de vacas faenadas en frigoríficos locales y las muestras se clasificaron en: proestro, metaestro y diestro. Se evaluó la presencia de BMP-5 en el FOb, obtenido por perfusión a partir de 5 oviductos de cada estadio. Se estimó la concentración proteica con el kit Micro BCATM y se realizó la detección de BMP-5 mediante western blot, utilizando un anticuerpo primario anti-BMP-5. En las muestras de FOb de los tres estadios analizados, se observó una banda de 21 kDa correspondiente a la forma madura de BMP-5. Adicionalmente, para determinar la interacción de BMP-5 del FOb con ovocitos bovinos, se obtuvieron complejos cúmulo-ovocitos (COCs) y se maduraron in vitro. Se separaron tres lotes: a) COCs, b) Ovocitos desnudos obtenidos por tratamiento de los COCs con hialuronidasa y c) Ovocitos desnudos sin zona pelúcida, digerida mediante incubación con pronasa. Cada lote se incubó 2 h en medio TCM 199 suplementado con albúmina bovina (5 mg/ml) o FOb (5 mg de proteínas/ml), en estufa a 39 ºC y 5% CO2. Las muestras se evaluaron mediante inmunofluorescencia indirecta y microscopía confocal utilizando un anticuerpo anti-BMP-5. Se observó señal a nivel de las células foliculares y la membrana plasmática de ovocitos madurados in vitro, y con mayor intensidad en la zona pelúcida, solamente en las muestras tratadas con FOb. La presencia de BMP-5 en el fluido oviductal y su detección en ovocitos incubados con FOb, nos permiten considerar que este factor podría tener una acción biológica sobre la gameta femenina durante su tránsito por el oviducto.