Regulación transcripcional del gen asr de Salmonella enterica serovar Typhimurium por el sistema de dos componentes RcsCDB y su importancia en la supervivencia de la bacterias al proceso de digestion gastrointestinal

MONICA FLORENCIA TORREZ LAMBERTI; MARIA FLORENCIA BALLESTEROS; MARÍA DE LAS MERCEDES PESCARETTI; FABIAN E. LOPEZ; MÓNICA A. DELGADO

Sao Pedro - SP - Brasil

Congreso; XXIV JORNADAS JÓVENES INVESTIGADORES AUGM; 2016

Introducción: Numerosas enfermedades infecciosas en humanos son producidas por bacterias. Salmonella spp. es uno de los patógenos bacterianos transmitidos por los alimentos con más frecuencia en los seres humanos1. Las infecciones por Salmonella generan compromiso gastrointestinal que se acompaña de inflamación del epitelio intestinal, diarrea y vómitos, y hasta fiebre tifoidea7. La expresión de los genes necesarios para adaptarse a los diferentes ambientes adversos que deben superar para infectar al hospedador están regulados por sistemas de dos componentes (TCS)14. El sistema RcsCDB de Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium) regula la expresión de genes de virulencia, entre ellos el gen asr. Este gen codifica para una proteína de acido shock necesaria para el establecimiento de la infección por S. Typhimurium15.Objetivos: El objetivo de este trabajo fue determinar la importancia de la regulación del gen asr por el sistema RcsCDB, teniendo en cuenta las condiciones a las que debe enfrentarse S. Typhimurium una vez que entra al tracto digestivo del hospedador. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio bioinformático de la región promotora del gen asr. Para comprobar la funcionalidad del sitio de unión encontrado para RcsB sobre Pasr, se determinó el efecto de dicho regulador sobre la trascripción de asr mediante determinación de actividad -galactosidasa en diferentes condiciones de activación del sistema RcsCDB. Luego, para analizar la capacidad de unión del regulador RcsB a la región promotora de asr se realizaron ensayos de retardo en gel. Finalmente, utilizando un modelo de digestión gastrointestinal in vitro se estudio la supervivencia de la mutante al gen asr, rcsB, asr rcsB, utilizando como control la cepa salvaje.Resultados: El estudio bioinformático reveló la presencia de un posible sitio de unión del regulador RcsB en la región promotora de Pasr. Los resultados de actividad -galactosidasa determinaron que RcsB es capaz de regular de manera negativa la transcripción de asr. Los resultados obtenidos en el ensayo de retardo en gel de poliacrilamida demuestran que RcsB se une directamente al promotor Pasr regulando negativamente la expresión de asr. El ensayo del efecto de la digestión gastrointestinal evidencio la importancia del regulador RcsB para la supervivencia de la bacteria, como así también el efecto nocivo del gen asr durante el proceso gástrico, no así en el momento de la infección. Conclusiones: Nuestros datos demuestran que RcsB regula negativamente y en forma directa la expresión de asr, por unión al promotor Pasr. Además, determinamos que durante el paso por el tracto digestivo asr seria nocivo para la bacteria, siendo requerido una vez que el patógeno logra establecer la infección.