CONTRATADOS
GIULIETTI Ana Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de anticuerpos catalíticos en cultivos in vitro de Nicotiana tabacum
Autor/es:
MARTÍNEZ, C; GIULIETTI A. M.; ALVAREZ, MA
Lugar:
Santa Rosa, La Pampa
Reunión:
Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004
Institución organizadora:
Asoc. Argentina Fisiología Vegetal
Resumen:
El término "Molecular Farming" describe la aplicación de técnicas moleculares para sintetizar productos comerciales en plantas. Se puede aplicar tanto a la sobreexpresión de productos propios de la planta, como a la producción de compuestos que son completamente nuevos para ella. Dentro de esto último, los anticuerpos ofrecen el más extenso rango de aplicaciones.            Los "plantibodies" son una opción económica, práctica y novedosa de la producción de anticuerpos a gran escala. Se han obtenido rendimientos de más del 1% de anticuerpo sobre el total de las proteínas solubles, lo que convierte a estas glicoproteínas en las primeras moléculas terapéuticas derivadas de plantas con fines comerciales (Wongsamuth, & Doran, 1997). Dado que la producción de proteínas recombinantes en cultivos a campo está sujeto a condiciones ambientales no reproducibles, los cultivos celulares resultan ser el método más atractivo y que, además, permite un control total de las variables que afectan la producción del anticuerpo.             El objetivo de nuestro trabajo fue establecer cultivos in vitro (callos, suspensiones celulares y raíces transformadas) de Nicotiana tabacum capaces de expresar el anticuerpo catalítico murino 14D9 que hidroliza enol-éteres de forma eneantoespecífica. Se analizó también la influencia de la señal de retención en retículo KDEL sobre los niveles de expresión de anticuerpo así como la influencia de agentes estabilizadores de proteínas (PVP, gelatina)  y agentes permeabilizantes (DMSO) sobre los niveles de anticuerpo alcanzados en cultivos de suspensiones celulares y raíces transformadas. Se trabajó con dos líneas de plantas transgénicas que se diferencian por la presencia en una de ellas de la secuencia KDEL de retención en retículo. Se establecieron cultivos(callos) en medio MSRT sólido  (Nigra y col, 1989) con ácido naftalenacético (ANA) y cinetina (K) en relación 2ppm : 0.2ppm como reguladores de crecimiento. Las suspensiones celulares se establecieron a partir de callos friables en  Erlenmeyers de 150-mL conteniendo medio  MSRT con el agregado de 2,4-diclorofenoxiacético(2,4-D) (0.2, 0.5, 1ppm) o ANA : cinetina (1:1, 2:1, 2:0.2). Se identificaron líneas capaces de expresar el anticuerpo en forma estable. En el caso de raíces transformadas, obtenidas mediante transformación con Agrobacterium rhizogenes (Alvarez y col, 1994) se alcanzaron mayores niveles de expresión en la línea 6AcK. Se realizaron estudios cinéticos durante 30 días, a los 20 días de cultivo el contenido de 14D9 fue de 5% respecto al contenido total de proteína soluble (PTS) en la línea 6AcK. Se detectaron bajos niveles de anticuerpo en el medio de cultivo en los cultivos de raíces transformadas de la línea 6AcK, no se detectó anticuerpo en el medio de cultivo en la línea 2Ac. El agregado de DMSO (2.8% P/V) mostró una influencia positiva con un incremento del 8% en los niveles de 14D9 en biomasa.