CONTRATADOS
GIULIETTI Ana Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
Biocatálisis como estrategia para la producción de compuestos de interés farmacéutico: Alcaloides del tropano
Autor/es:
CARDILLO A; CARDILLO S; RODRÍGUEZ TALOU J; GIULIETTI AM
Lugar:
La Plata
Reunión:
Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones (EnReBB); 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones
Resumen:
La enzima Hiosciamina 6B-hidroxilasa (H6H) cataliza mediante dos reacciones secuenciales la conversión de hiosciamina en 6β-hidroxihiosciamina y escopolamina, alcaloides ampliamente utilizados en medicina debido a su actividad anticolinérgica (Figura 1). Estos alcaloides son obtenidos a partir de la extracción de plantas pertenecientes a la familia Solanaceae, dado que la síntesis química de los mismos es dificultosa y costosa. Por ésta razón, resulta de interés el desarrollo de un proceso de biotransformación para la producción de los mismos con fines farmacéuticos. En éste trabajo se exploró la posibilidad de producir 6B-hidroxihiosciamina y escopolamina mediante una estrategia alternativa utilizando a la enzima H6H como biocatalizador. Para lograrlo, el gen h6h fue amplificado a partir de preparaciones de ARNt obtenidas desde anteras inmaduras de Brugmansia candida, una planta nativa de Sudamérica y productora de alcaloides del tropano. El h6hADNc fue clonado en diferentes vectores para producir enzimas etiquetadas y no etiquetadas en Saccharomyces cerevisiae. La H6H fue expresada como fusión en su extremo C-terminal al epitope V5 y una cola de histidinas (H6H-V5-6His). Por otro lado, fue fusionada en su extremo N-terminal al dominio de unión a celulosa (CBD-H6H) con el objeto de combinar los pasos de purificación e inmovilización a celulosa, una matriz de bajo costo. Para explorar las distintas estrategias propuestas, se ensayó la actividad de la enzima a partir de extractos crudos de las cepas de levaduras inducidas. Los ensayos se llevaron a cabo a 30°C por 15h. El análisis de los alcaloides se realizó por HPLC con detección UV, fase móvil Ácido octanosulfónico 0,01M pH3/Metanol (65:35) y velocidad de flujo 1 ml/min. Los resultados mostraron que la enzima H6H etiquetada y no etiquetada fueron capaces de transformar hiosciamina, demostrando la expresión funcional del h6hcDNA en levaduras. Sin embargo, los productos obtenidos fueron diferentes de acuerdo a la enzima utilizada. La H6H y la CBD-H6H convirtieron hiosciamina en 6β-hidroxihiosciamina y escopolamina, mientras que la H6H-V5-6His solo produjo 6B-hidroxihiosciamina. Los resultados obtenidos proveerán de herramientas para abordar el desarrollo de procesos biocatalíticos de producción de escopolamina y 6B-hidroxihiosciamina, alcaloides de mayor valor económico, mediante la aplicación de enzimas inmovilizadas.