Modo de acción de sakacina G, en medio líquido, para la determinación de Listeria innocua como sustituto de Listeria monocytogenes

RIVAS, FRANCO P.; CAYRÉ, M.E.; CAMPOS C. A.; CASTRO M.

Mendoza

Congreso; CONGRESO LATINOAMERICANO DE INGENIERÍA Y CIENCIAS APLICADAS; 2018

Facultad de Ciencias Aplicadas a la Industria, Universidad Nacional de Cuyo

Listeria innocua ha sido utilizada por muchos investigadores como un sustituto no patógeno de Listeria monocytogenes. Sin embargo, esto ha sido criticado porque sus características de supervivencia no son, en todos los casos, tan similares. El presente estudio se realizó para comparar las sensibilidades de las cepas Listeria innocua ATCC 33090 y Listeria monocytogenes 01/155 frente a sakacina G, mediante un estudio de modo de acción, para validar a L. innocua como el sustituto de Listeria monocytogenes en futuros estudios en alimentos, con el mayor margen de seguridad que esto implicaría. Para la determinación del modo de acción de sakacina G en medio líquido, el sobrenadante libre de células (SLC) neutralizado de la cepa productora Lactobacillus curvatus ACU-1, obtenido mediante centrifugación y esterilizado por filtración, fue añadido a cultivos en fase exponencial de los indicadores Listeria innocua ATCC 33090 y Listeria monocytogenes 01/155 (Laboratorio de Bacteriología Aplicada, INIQUI-CONICET). Los sistemas control consistieron en caldo BHI libre de bacteriocina inoculado con las bacterias indicadoras. El crecimiento de las mismas se monitoreó mediante lecturas de densidad óptica (DO) a 600 nm a intervalos de 1 h durante 12 h. El número de células sobrevivientes al tratamiento con bacteriocinas fue determinado mediante recuentos en placa a lo largo del ensayo, expresado como Log10 de unidades formadoras de colonias (ufc.ml-1) frente al tiempo. Cabe señalar que las diferencias de un orden de magnitud son generalmente consideradas como de importancia microbiana, por varios autores. La adición del SLC en la fase exponencial de crecimiento de las suspensiones celulares de L. innocua y L. monocytogenes dio como resultado una disminución en la densidad óptica, siguiendo un comportamiento similar en ambos casos; reduciéndose de 0.57 ± 0.14 (al momento de agregar el SLC) a 0.25 ± 0.13 (al final del ensayo); mientras que los sistemas controles presentaron un promedio final de DO de 1.45 + 0.05. Estos resultados están en consonancia con los recuentos bacterianos de ambos microorganismos indicadores, que mostraron una disminución en las células viables de 10.34 ± 0.34 Log10 ufc.ml-1 (en el momento de agregar el SLC) a 9.31 ± 0.01 Log10 ufc.ml- 1 (al final de la prueba), confirmando así el efecto inhibidor del SLC. En las muestras no tratadas (controles), no se observó inhibición del crecimiento de los microorganismos indicadores, presentando un recuento de 11.86 ± 0.04 Log10 ufc.ml-1 al final del ensayo, 2.54 Log10 ufc.ml-1 mayor que los sistemas tratados con bacteriocina. Además, como no se observaron diferencias estadísticas entre ellos, ni al comienzo de la prueba, ni en el momento de la adición de bacteriocina, o al final del experimento, se puede suponer que la sakacina G producida por Lb. curvatus ACU-1 ejerció el mismo patrón de inhibición contra L. innocua ATCC 33090 y L. monocytogenes 01/155. En vista de estos resultados, y del hecho de que L. monocytogenes es un patógeno bien conocido, se plantea trabajar con L. innocua como bacteria indicadora para futuros ensayos, obteniendo así un mayor margen de seguridad.