PURIFICACIÓN DE LA BACTERIOCINA SAKACINA Q PRODUCIDA POR LACTOBACILLUS CURVATUS ACU-1 POR CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO CATIÓNICO

RIVAS, FRANCO P.; CAYRÉ, M.E.; CAMPOS C. A.; CASTRO M.P.

Córdoba

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos 2016; 2016

Ministerio de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Córdoba

La aplicación de bacteriocinas purificadas ofrece una mejor herramienta de control para los productos alimenticios, en comparación a la adición de la bacteria productora; con este método se puede alcanzar una mejor distribución y se evitan los cambios físicos, químicos y sensoriales que conllevan los procesos fermentativos. El objetivo de este trabajo fue realizar una purificación de la bacteriocina sakacina Q, producida por Lactobacillus curvatus ACU-1. El sobrenadante libre de células (SLC) conteniendo la bacteriocina se obtuvo a partir de un cultivo de 36 h de la célula productora en caldo MRS, mediante centrifugación y posterior filtración sobre filtros de acetato de celulosa de 0,22 µm. A fin de determinar las mejores condiciones para recuperar la bacteriocina mediante cromatografía de intercambio catiónico, dos fracciones del SLC se mezclaron con SP-Sepharose Fast Flow (GE Healthcare Life Sciences, Estados Unidos) en una concentración 1:40 (v/v). Las mezclas se mantuvieron bajo agitación durante 30 min y se decantaron en columnas de vidrio, obteniéndose suspensiones de gel sedimentadas que contenían tentativamente la bacteriocina adsorbida. Se ensayaron dos métodos de elución: i) utilizando concentraciones crecientes de NaCl en buffer acetato de sodio: 25 mM, 50 mM, 100 mM, 150 mM, 200 mM, 300 mM y 500 mM, condiciones normalmente usadas para recuperar bacteriocinas a partir de sefarosa y ii) mediante NaCl 1,5 M en agua destilada, método usado normalmente para recuperar bacteriocinas a partir de Carboximetil-Sephadex. Ambos procesos de elución se realizaron con el SLC a pH 4,3 (pH alcanzado por la acidificación de la bacteria láctica) y a pH 6,5 (neutralizando con NaOH 4N). La actividad antimicrobina del SLC y las fracciones eluídas se evaluó mediante la técnica de difusión en agar utilizando Listeria innocua ATCC33090 como microorganismo indicador. El resultado se expresó en Unidades Arbitrarias por mililitro (UA/ml), siendo UA= (1000/v)/d; donde, v: volumen sembrado en el pocillo y d: dilución mayor que presenta una zona clara de inhibición del microorganismo indicador. Además, se midió el diámetro del halo de la fracción eluída sin diluir. De todas las condiciones ensayadas, la única fracción recogida que presentó actividad antibacteriana fue la obtenida mediante la solución de NaCl 1,5 M en medio ácido, presentando una actividad de 800 UA/ml (título igual al SLC del que se parte), y un halo de 2,1 cm. La recuperación de la bacteriocina en una solución de NaCl en agua, resulta muy útil para su futura aplicación, ya que se trata de un aditivo ampliamente utilizado en la industria alimentaria.