Establecimiento in vitro de plántulas de Habranthus tubispathus

ROSSELLÓ, FERNANDO; MARINANGELI, PABLO; CURVETTO, NÉSTOR

Buenos Aires

Congreso; II Congreso Argentino de Floricultura y Plantas Ornamentales, I Encuentro latinoamericano de Floricultura; 2004

Instituto de Floricultura INTA

La germinación de semillas en medio estéril es una de las posibles vías para la obtención de plántulas in vitro que servirían como punto de partida (fase de establecimiento) para protocolos de micropropagación, inducción de callos y cultivo de suspensiones celulares. Aquí se informa la adaptación de técnicas para el establecimiento in vitro de plántulas de Habranthus tubispathus en forma axénica a partir de semillas. Se utilizaron semillas de la especie Habranthus tubispathus con 97% de poder germinativo. Las semillas se desinfectaron por la técnica de doble desinfección, i.e. las semillas se sumergieron durante 1 minuto en etanol 70% y luego en una solución de hipoclorito de sodio (0.8% de cloro activo) por 15 minutos. Luego se enjuagaron tres veces con agua estéril y se dejaron en el agua del último enjuague durante toda la noche para su imbibición. Al día siguiente se realizó la segunda desinfección con hipoclorito de sodio durante 15 minutos seguido por tres enjuagues con agua destilada estéril. Las semillas se sembraron in vitro para el establecimiento de plántulas en forma axénica. Se estudió el efecto de la adición de sacarosa al medio de cultivo y el de la concentración del medio basal Murashige y Skoog (MS) sobre el poder germinativo in vitro de las semillas y sobre el crecimiento de las plántulas. Siguiendo un diseño factorial, los tratamientos fueron: S0MS0: 0 g l-1 sacarosa + sin los componentes del medio MS; S0MS0.5: 0 g l-1 sacarosa + la mitad de la concentración de los componentes del medio MS; S0MS1: 0 g l-1 sacarosa + la concentración completa de los componentes del medio MS; S30MS0: 30 g l-1 sacarosa + sin los componentes del medio MS; S30MS0.5: 30 g l-1 sacarosa + la mitad de la concentración de los componentes del medio MS; y S30MS1: 30 g l-1 + la concentración completa de los componentes del medio MS. Para determinar el resultado de la desinfección se realizaron dos tratamientos de germinación sobre papel de filtro húmedo en cajas de Petri, en uno se sembraron semillas sin desinfectar (SD), embebidas con Agua destilada durante 24 horas y en el otro semillas desinfectadas según el protocolo descrito anteriormente (CD). Los porcentajes de germinación fueron mayores al 90 % en todos los tratamientos, aunque en el conteo a los 13 días de cultivo para los tratamientos conteniendo sacarosa, se observaron bajos porcentajes de germinación, que no superaron el 30 %, efecto debido a un estrés osmótico que aún fue insuficiente para inhibir la germinación. La desinfección afectó muy poco el poder germinativo. Sin embargo, la germinación in vitro con semillas desinfectadas llegó al 100%. Es importante destacar que no se observó contaminación en ninguno de los tratamientos in vitro.La longitud media de la primer hoja y el peso fresco medio de las plántulas fueron significativamente mayores (P<0,001) en los tratamientos que no contenían sacarosa. A su vez, dentro de los medios que no contenían sacarosa, los dos tratamientos con componentes MS (S0MS0.5 y S0MS1) tuvieron una longitud media de la primera hoja mayor (P<0,001) que S0MS0. Dentro de los medios que contenían sacarosa se observaron diferencias estadísticamente significativas (P<0,001) a favor del medio que contenía la dotación completa de sales del medio MS (S30MS1) respecto del que no se le había agregado sales (S30MS0). A partir de los resultados obtenidos, el medio de cultivo con la dotación completa de sales sin el agregado de sacarosa, resulto ser el más apropiado para el establecimiento in vitro de plántulas de Habranthus tubispathus a partir de semillas.