Caracterización fenotípica y molecular mediante AFLP de retrocruzas de un híbrido de segundo ciclo en tomate (Solanum lycopersicum) y detección de QTLs

CACHIARELLI, P.; CABODEVILA, V.G.; PRATTA, G.R.

Zavalla

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

Sociedad de Biología de Rosario

Los AFLP (polimorfismo en la longitud de los fragmentos amplificados) permiten la caracterización de genotipos y la detección de QTLs (loci de caracteres cuantitativos). Los objetivos fueron caracterizar treinta y ocho individuos de las retrocruzas (BCs) provenientes del híbrido de segundo ciclo (HSC) (ToUNR18xToUNR1) mediante 6 combinaciones de cebadores de AFLP y 10 caracteres morfológicos cuantitativos de importancia agronómica, y detectar QTLs a partir de estos datos. Los caracteres estudiados en fruto fueron: peso, diámetro, altura, sólidos solubles, acidez, color, pH, forma, firmeza y vida poscosecha. Las 6 combinaciones de cebadores fueron previamente seleccionadas sobre un total de 36 por detectar elevados número de bandas y porcentaje de polimorfismo. La amplificación selectiva, la siembra de geles desnaturalizantes de poliacrilamida (6%) y la tinción con nitrato de plata se realizaron siguiendo protocolos estándares. Con el propósito de evaluar la asociación entre bandas de AFLP y caracteres cuantitativos, se aplicó el análisis de único punto (ANOVA a un criterio de clasificación) para identificar QTLs de interés agronómico. Para ello, se verificó la normalidad de cada carácter mediante la prueba de Shapiro-Wilk y se utilizó la prueba de χ2 para evaluar la segregación mendeliana de cada banda polimórfica. Luego, para cada combinación de fragmentos asociados a un mismo carácter se realizó la prueba de χ2 para probar la hipótesis de segregación independiente (1:1:1:1) y se aplicó un análisis factorial de ANOVA para detectar interacciones entre los pares de bandas que segregaron independientemente. Cada banda fue identificada con un número y una letra (peso de la banda y codificación de la combinación). Las amplificaciones revelaron un total de 111 bandas, de las cuales 67 (60,36%) resultaron ser polimórficas. El número de fragmentos analizados por combinación fue de: 27 para la combinación F, 28 para la combinación JJ, 7 para la combinación II, 20 para la combinación J, 14 para la combinación H y 15 para la combinación HH. Quince (22,39%) de los 67 fragmentos siguieron una segregación mendeliana (1:1). De las 15 bandas que ajustaron a la proporción 1:1, 7 (46,67%) mostraron comportamiento de novo presentes o ausentes en las BCs. Todos los caracteres resultaron normales, a excepción de diámetro y forma. La transformación logarítmica de forma se distribuyó normalmente pero ninguna transformación habitual fue efectiva para diámetro. Nueve (60,00%) de los 15 fragmentos polimórficos que ajustaron a una segregación 1:1 mostraron asociación con al menos un carácter fenotípico (sólidos solubles, altura, peso y forma). Diez pares de bandas asociadas al mismo carácter (sólidos solubles, altura y forma, respectivamente) segregaron independientemente. Sólo el par 135-131IIx217F, asociado al carácter forma, mostró una interacción significativa (p = 0,03), implicando epistasis. Se detectaron efectos pleiotrópicos para las bandas: 217F (asociada a sólidos solubles y forma), 129JJ (asociada a sólidos solubles, altura y forma) y 179J (asociada a altura y forma). Se concluye que los AFLP permitieron caracterizar molecularmente genotipos pertenecientes a las retrocruzas de un HSC y detectar QTLs de importancia agronómica.