Evidencia morfológico-funcional de diferenciación neuronal embrionaria in vitro

MORENO G; REYNALDO M; SPINEDI E; CARRI N

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; L Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2005

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Poco se conoce sobre la ontogenia y diferenciación del sistema neurosecretorio supraóptico-paraventriculo-neurohipofisario (peptidérgico). La utilización de un cultivo primario de células hipotalámicas, de origen embrionario, podría permitir estudiar la  diferenciación de estas células. La sobrevida de neuronas en cultivo mejora cuando la procedencia es de tejido embrionario, aunque se ha encontrado que las neuronas que sobreviven en estos sistemas expresan baja vasopresina (AVP) y sólo trazas de occitocina (OXY) en condiciones basales. El objetivo del presente estudio fue desarrollar un cultivo neuronal primario (CNP) que permita la evaluación del sistema magnocelular-hipotalámico (AVP- y OXY-érgicos) y estudiar los efectos de la interacción neuronal-glial. Se realizó un CNP de material obtenido por disociación mecánica de hipotálamo E18 (ambos sexos) de rata. Se utilizó un medio de cultivo apropiado para neuronas conteniendo un inhibidor de proliferación. La caracterización del CNP neurosecretorio se realizó por la detección en el medio de cultivo de AVP y OXY, a los días 8, 10, 13, 15 y 17. Se realizó inmunocitoquímica, en cultivos de los diferentes días, identificándose a las células gliales, con anti-proteina acida fibrilar glial (GFAP), y a las neuronas, con anti-AVP y anti-OXY. Los resultados indican una liberación espontánea de AVP y OXY, en forma diferencial dependiendo del día de cultivo, observándose diferencias significativas (p<0.05) en la secreción al d13, vs. d8, para AVP (pg/ml): 23,34±1,61 vs. 15,98±1,02 y para OXY (pg/ml): 119,95±12,25 vs. 44,96±4,86, respectivamente. También encontramos que en el d17 se alcanzó sólo un 6,67±2,08 % de células gliales en el material analizado. Podemos concluir que el diseño experimental utilizado resulta en un buen bioensayo nervioso para el estudio de la función del sistema peptidérgico hipotálamo-neurohipofisario, y de las interacciones de éste con las células gliales