Análisis del efecto de carbohidratos lácteos y extractos vegetales sobre células Caco-2 por microscopía de fluorescencia y electrónico de transmisión

PERALTA MI; CODEMO CA; GRONDONA E; SORIA EA; ALBRECHT C; SABINI MC

Córdoba

Congreso; IX Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2024

CEPROCOR

El permeado de lactosuero (PL) es un subproducto de industria alimenticia frecuentemente descartado, aunque este puede ser recuperado para su utilización en el desarrollo de bebidas. En estudios previos del equipo se ha combinado con extractos vegetales (tegumento de maní, Arachis hypogaea L.; partes aéreas de marcela del campo, Achyrocline satureioides; hojas de yerba mate, Ilex paraguariensis) con el objetivo de elaborar una bebida que no solo aproveche el PL, sino que también sea beneficioso para la salud. En dichos estudios se encontraron concentraciones citotóxicas 50% de la combinación de PL (cuya lactosa se hidrolizó totalmente) con extracto etanólico de tegumento (PL+EET, 125 µg/ml), extracto acuoso frío de Achyrocline satureioides (PL+EAF, 210 µg/ml) y extracto etanólico de Ilex paraguariensis (PL+EEIP, 223 µg/ml), en células de adenocarcinoma colorrectal, Caco-2.Considerando estos valores, el objetivo del presente estudio es profundizar en el estudio del efecto de los tratamientos (combinaciones) sobre la apoptosis en Caco-2, utilizando citofluorescencia para determinar el tratamiento más efectivo, y sobre este, analizar, por microscopía electrónica de transmisión (MET), la morfometría y morfología mitocondrial. Las células tratadas se incubaron durante 24 hs a 37°C, CO2, 5% y atmósfera húmeda. Se utilizó un control celular sin tratar (CC) y uno tratado solo con PL. Para el ensayo de citofluorescencia se realizó una doble tinción con fluoresceina diacetato (FDA), que marca células viables y yoduro de propidio (IP) como marcador de células en apoptosis. Se retiraron los sobrenadantes y se tiñeron las células, previamente marcadas con DAPI, con la solución de trabajo FDA/IP. Se incubó 5 minutos en hielo y se observaron las células en un microscopio de epifluorescencia. Se tomaron fotografías por triplicado y mediante Fiji/ImageJ, se calculó el porcentaje de células en apoptosis. Para el análisis ultraestructural, las células tratadas fueron resuspendidas, centrifugadas y fijadas. Las micrografías de las muestras obtenidas por MET fueron analizadas en FIJI/ImageJ, para determinar el número de mitocondrias por célula, área, circularidad (4π x área/(perímetro)2) y elongación (eje mayor/eje menor) de dicha organela. Los datos se expresaron como media±DE y se analizó la diferencia significativa (p