INVESTIGADORES
ALBA SOTO Catalina Dirney
congresos y reuniones científicas
Título:
DESARROLLO DE UN ENSAYO UTILIZANDO CITOMETRÍA DE FLUJO PARA TESTEAR EN SIMULTÁNEA LA ACTIVIDAD Y SELECTIVIDAD DE COMPUESTOS CONTRA TRYPANOSOMA CRUZI.
Autor/es:
MIRANDA, CRISTIAN GABRIEL; SOLANA, MARIA ELISA; PINO-MARTINEZ, AGUSTINA MARIA; CURTO, MARIA DE LOS ANGELES; LAMMEL, ESTELA; SCHIJMAN, ALEJANDRO G.; ALBA SOTO, CATALINA D.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión Conjunta 2014 entre la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI),; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)
Resumen:
618) DESARROLLO DE UN ENSAYO UTILIZANDO CITOMETRÍA DE FLUJO PARA TESTEAR EN SIMULTÁNEO LA ACTIVIDAD Y SELECTIVIDAD DE COMPUESTOS CONTRA TRYPANOSOMA CRUZI. Miranda, Cristian G1; Solana, María E1; Pino Martínez, Agustina M1; Curto, María A2; Lammel, Estela1; Schijman, Alejandro G2; Alba Soto, Catalina D1 Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica (IMPaM)1 Laboratorio de Biología Molecular de la Enfermedad de Chagas, Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular (INGEBI)- CONICET2 El tratamiento actual de la enfermedad de Chagas se basa enla administración de dos compuestos: benznidazol y nifurtimox.Estas drogas presentan una eficacia del 80% sólo cuando sonutilizadas en la etapa aguda de la infección. Además, presentanefectos secundarios que a veces requieren de la interrupción deltratamiento. Para el desarrollo de terapias más efectivas y segurases necesario implementar métodos para evaluar potenciales drogas en los estadíos parasitarios relevantes en la infecciónhumana. Desarrollamos una cepa transgénica de T. cruziqueexpresa la proteína verde fluorescente (GFP) transfectando conel vector integrativo pTREXgfp la cepa de T. cruzi K98 pertenecienteal linaje TcI. Verificamos que el parásito transgénico K98GFP es fluorescente en los estadíosepimastigote, tripomastigotemetacíclico, tripomastigote sanguíneo y amastigote intracelular. La expresión de GFP es estable (alrededor del 80%)en todos los estadíosin vitro y en el modelo murino, en ausenciade drogas de selección. Además, comprobamos que conservalas características biológicas de la cepa nativa. Con ella desarrollamos un ensayo in vitro basado en citometría de flujo para evaluar simultáneamente la actividad amastigoticida y el índice de selectividad de compuestos. En el ensayo infectamos la líneacelular J774 con tripomastigotes sanguíneos de K98-GFP en unaMOI 5:1 en placas de 96 pocillos por triplicado. Luego de 4 hsde cultivo a 37°C en CO2, se eliminaron los parásitos que noingresaron a las células y se inició la administración diaria de losfármacos. Al cabo de 72 hs de cultivo a las células cosechadasse las tiñó con ioduro de propidio y se las adquirió en citómetrode flujo analizando la presencia de eventos en los canalesFL1 y FL2. Estos ensayos permitirán el tamizaje in vitro de unmayor número de fármacos y proporcionarán una herramientarápida y precisa que agilizará su evaluación en modelos in vivoy posteriormente en ensayos clínicos.