CARACTERIZACIÓN BIOINFORMÁTICA, MOLECULAR Y CAPACIDAD INMUNOGÉNICA DE NUEVOS CANDIDATOS VACUNALES DE TRYPANOSOMA CRUZI.

ZILIANI MARIA; IGLESIAS AYELÉN A.; ALBA SOTO CATALINA D.; GONZALEZ-CAPPA STELLA MARIS; SANCHEZ DANIEL O.; TEKIEL VALERIA

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

CARACTERIZACIÓN BIOINFORMÁTICA, MOLECULAR Y CAPACIDAD INMUNOGÉNICA DE NUEVOS CANDIDATOS VACUNALES DE TRYPANOSOMA CRUZI. María Ziliani1, Ayelén A. Iglesias1, Catalina D. Alba-Soto2, Stella M. González Cappa2, Daniel O. Sánchez1, Valeria Tekiel1 1Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (IIB-UNSAM), CONICET, 2Depto. Microbiol., Parasitol. e Inmunol. Fac. Medicina, UBA En estudios previos, realizamos ensayos de inmunización genética y desafío en ratones empleando una biblioteca de expresión de cDNA de tripomastigotes de T. cruzi. De esta forma identificamos un grupo de 22 nuevos candidatos vacunales, compuesto por fragmentos de genes y/o marcos abiertos de lectura. Sólo 5 de estos candidatos están anotados como proteínas en el genoma de T. cruzi: un miembro de la familia MASP(Tc00.1047053510047.60); un miembro de la familia TS (Tc00.1047053509629.10); un miembro de la familia TcTASV (Tc00.1047053511675.3); p67 (Tc00.1047053510825.30) y la proteína hipotética Tc00.1047053507003.70. La familia TcTASV fue identificada por nuestro grupo y está siendo analizada y caracterizada actualmente. Sin embargo, ya que no hay reportes de los genes Tc00.1047053510825.30 y Tc00.1047053507003.70, un objetivo fue realizar una caracterización bioinformática y molecular de los mismos. Tc00.1047053510825.30 (p67) es un gen de copia única que codifica para una proteína transmembrana de 72 kDa de localización lisosomal/endosomal con dominios hidrolasa y fosfolipasa. Posee numerosos sitios de glicosilación y alta densidad de epitopes T y B. Su ortólogo en T. brucei está implicado en el mantenimiento de la estructura del lisosoma y el crecimiento normal del estadio tripomastigote. Tc00.1047053507003.70 (ph29) es una proteína de 29 kDa sin función asignada, pertenece al 30% de proteínas más antigénicas de T. cruzi y posee un dominio metil-transferasa. En varios kinetoplástidos, proteínas con estos dominios participan del capping de mRNAs. Fragmentos de p67 y ph29, de 46 y 21 kDa respectivamente, fueron clonados, expresados y las proteínas recombinates se utilizaron para inmunizar ratones. Los antisueros específicos se emplearon para analizar el patrón de expresión de estos genes en T. cruzi. Un segundo objetivo fue analizar la capacidad protectiva de 9 de los nuevos candidatos vacunales, seleccionados por su nivel de antigenicidad. Se inmunizaron ratones con 2 dosis de ADN plasmídico y GM-CSF como adyuvante. En la tercera dosis se administraron las proteínas recombinantes, emulsionadas en sales de aluminio. Los animales se desafiaron con una dosis letal de tripomastigotes. Se detectaron picos de parasitemias menores y más tardíos en los animales vacunados, sugiriendo que este protocolo permite un control parcial de las parasitemias. En conjunto, en este trabajo presentamos la caracterización parcial de dos genes de función desconocida en T. cruzi y su capacidad protectiva dentro de un grupo de 9 candidatos vacunales novedosos.