CARACTERIZACIÓN DE UNA CEPA DE TRYPANOSOMA CRUZI DEL LINAJE TC I QUE EXPRESA GFP: COMPARACIÓN DEL DAÑO TISULAR, TROPISMO Y SUSCEPTIBILIDAD AL BENZNIDAZOL ENTRE LA CEPA NATIVA Y LA TRANSGÉNICA.

MIRANDA CRISTIAN GABRIEL; CURTO MARIA DE LOS ANGELES; NOVOA MERCEDES; SOLANA MARIA ELISA; LAMMEL ESTELA; SCHIJMAN ALEJANDRO G.; ALBA SOTO CATALINA D.

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

Las poblaciones de T.cruzi están distribuidas en 6 UDTs (T.cruzi I a VI) de diferente distribución geográfica y circulación en los ciclos de transmisión. Se postula que las diferencias biológicas de las cepas de T.cruzi están implicadas en la diversidad de escenarios clínicos de la enfermedad de Chagas. Para conocer el papel de la diversidad genética en el curso de la enfermedad nos propusimos construir líneas de parásitos transgénicos pertenecientes a los linajes de T. cruzi. A partir de la cepa K98 perteneciente al UDT I construimos la cepa transgénica K98-GFP que expresa establemente la proteína fluorescente verde. En este trabajo comparamos el tropismo y daño tisular en el modelo murino y la susceptibilidad al benznidazol de las cepas transgénica y nativa. Ratones Balb-c infectados con K98-WT o GFP (1.105 tripomastigotes por vía intraperitoneal) se sacrificaron para la obtención de tejidos. Estos fueron procesados y teñidos con hematoxilina-eosina. Para el análisis cuantitativo se adquirieron imágenes digitales de campos al azar en las que se calculó el número de infiltrados focales y su extensión en pixeles (px) empleando el software ImageJ (NIH, USA). Se estableció la presencia de infiltrados inflamatorios difusos, focos inflamatorios y áreas de reemplazo fibrótico y graso tanto en cortes histológicos de músculo estriado esquelético (cuádriceps) como en cardíaco a los 46 y 140 días post infección con las cepas K98 GFP y WT. El análisis cuantitativo de los focos inflamatorios en corazón y músculo esquelético determinó que no existen diferencias significativas en el porcentaje y extensión de los mismos entre ambas cepas. Se detectó la presencia de ocasionales nidos de amastigotes en músculo cardíaco y esquelético no así en bazo o hígado tanto con la cepa nativa como con la transgénica corroborando el patrón miotrópico de K98. Se determinó la viabilidad in vitro de tripomastigotes sanguíneos obtenidos de ratones infectados y cultivados en presencia de benznidazol. Se confirmó que tanto la cepa nativa como la transgénica son susceptibles a esta droga tripanocida. Estos resultados nos alientan a extender estas manipulaciones al resto de los linajes de T.cruzi. La construcción de cepas transgénicas pertenecientes a distintas UDTs portadoras de genes reporteros de proteínas fluorescentes, permitirá profundizar la caracterización y localización anatomopatológica de poblaciones con distinto histotropismo y generar modelos para estudiar susceptibilidad diferencial a drogas tripanocidas. Financiado por CONICET, FONCYT y UBACYT.