INVESTIGADORES
CARDILLO Alejandra Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción de escopolamina: la biocatálisis con enzimas aisladas como alternativa a la producción convencional
Autor/es:
MINOIA, JUAN MAURICIO; CARDILLO, ALEJANDRA BEATRIZ
Lugar:
Encarnación
Reunión:
Jornada; XXV Jornadas de Jóvenes Investigadores AUGM; 2017
Institución organizadora:
Asociación de Universidades Grupo Montevideo - Universidad Nacional de Itapúa
Resumen:
La escopolamina, y su precursor la hiosciamina, son alcaloides del tropano de gran interés farmacéutico por sus propiedades anticolinérgicas. Si bien la escopolamina tiene mayor demanda a nivel industrial como consecuencia de su mayor actividad y menores efectos adversos, es producido en las plantas en un porcentaje menor que su precursor. La hiosciamina 6b-hidroxilasa (H6H) es la enzima que lleva a cabo la transformación de hiosciamina en anisodamina y escopolamina mediante la catálisis de dos reacciones consecutivas. Actualmente, estos principios activos se obtienen mediante cultivos de plantas pertenecientes a la familia Solanaceae, siendo las principales desventajas de este método el bajo porcentaje de escopolamina producido, su variabilidad y el tiempo de desarrollo de la planta. Si bien la industria farmacéutica ha intentado reemplazar el cultivo por la síntesis química, esta es compleja, de bajo rendimiento y no redituable económicamente. En este trabajo, exploramos el uso de la enzima H6H como biocatalizador para la producción de escopolamina a partir de su precursor la hiosciamina en una reacción in vitro. A tal fin, se clonó el gen de la H6H proveniente de Brugmansia candida fusionado a un dominio de unión a la quitina (ChBD) en un vector de expresión para E.coli. La fracción de proteínas solubles obtenida a partir de la inducción de la cepa recombinante (0,5mM IPTG, t=24hs, 20ºC, 250 rpm), se utilizó para ensayar la actividad in vitro de la enzima libre con el objetivo de corroborar su expresión funcional antes de la inmovilización. Utilizando como técnica analítica la cromatografía líquida de alta presión (HPLC) se observó bioconversión de hiosciamina a anisodamina, principalmente, y escopolamina, en menor medida.
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