Rol de la fosforilacion de S132 de la histona variante H2AX en Toxoplasma gondii

BOGADO SS; DALMASO MC; VANAGAS L; FENOY I; ANGEL S

Congreso; XXV reunión cientifica anual de la sociedad argentina de ptrotozoologia y enfermedades parasitarias; 2012

Toxoplasma gondii es una parásito intracelular obligado que pertenece al phylum apicomplexa y es el agente causal de la toxoplasmosis. Dado que el daño producido T gondii depende por la habilidad de diferenciarse y replicarse comprender que factores regulan estos procesos podría ayudar en el diseño de drogas. La histona variante H2A.X posee un motivo C-terminal muy conservado SQEF donde la serina de la posición 132 se encuentra fosforilado en el estadio de taquizoito en condiciones normales de cultivo y bajo estrés de daño al ADN. Como herramienta para estudiar el rol de dicha fosforilacion obtuvimos líneas de parásitos que expresan de manera ectópica H2AX salvaje y parásitos que expresan ectopicamente H2AX donde la serina 132 se encuentra mutada por una alanina. Demostramos que estas proteínas ectópicas son capaces de formar nucleosoma con la misma composición que la H2AX endógena y poseen el mismo patrón de localización en el genoma. Encontramos que los parásitos que expresan H2AX donde la serina fue mutada por alanina poseen un defecto en la replicación en condiciones normales y de daño al ADN con CPT (captothecina). Mientras que la expresión ectopica de H2AX salvaje no afecta la replicación en condiciones normales y además parece proteger frente al daño al ADN. Estudios de inmunofluoresncencia usando anti-PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) y anti-IMC (comlejos de membranas internas) mostraron además de los patrones de tinción correspondientes a los estadios G1, M y citokinesis; un nuevo patrón de tinción en donde posee el doble de tamaño pero sin parásitos hijos adentro y con el ADN parcialmente replicado que corresponde a una posible retraso en la fase S tardía durante el tratamiento con CPT. Asimismo estudios de citometria de flujo mostraron un aumento de la población en la S-M para la línea que expresa H2AX mutada en condiciones normales y de daño al ADN.