Expresión heteróloga de enterocina CRL 35 en Escherichia coli

MASÍAS RE; ACUÑA L; MORERO R; MINAHK C

Tafí del Valle

Congreso; XXVII Jornadas Científicas Asociación de Biología de Tucumán; 2010

Asociación de Biología de Tucumán

Enterocina CRL 35 es una bacteriocina producida por Enterococcus mundtii CRL 35. Este péptido demostró ser muy efectivo en controlar el crecimiento de Listeria monocytogenes, disipando la fuerza protón motriz e induciendo la pérdida de contenido de iones y pequeños solutos. Por otro lado, enterocina CRL 35 presentó efecto sinérgico con antibióticos, lo que abre la posibilidad de su utilización en clínica. Debido a que las bacteriocinas son sintetizadas en relativamente bajas concentraciones por las cepas productoras que deben ser además cultivadas en medios complejos, se hace muy difícil su posterior purificación. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue expresar enterocina CRL35 en Escherichia coli para asegurar alto rendimiento y un proceso de obtención simplificado. En el presente trabajo se subclonó el gen estructural de esta enterocina, munA, en el vector de expresión pET-22b(+) que permite insertar la secuencia de interés corriente abajo del péptido líder de la proteína PelB, garantizando la exportación al espacio periplásmico mediante el mecanismo general de secreción. Para la sobreexpresión se utilizó E. coli Rosetta-Gami, una cepa que cuenta con un plásmido que codifica ARNs de transferencia para codones raros en E. coli, asegurando la síntesis de cualquier proteína heteróloga. Enterocina CRL35 fue expresada exitosamente en E. coli, siendo transportada al espacio periplásmico y al sobrenadante del medio de cultivo, tanto en medio completo Luria-Bertani como en medio mínimo M9. Se determinaron las condiciones óptimas de producción en este último medio. Finalmente enterocina CRL35 fue purificada a homogeneidad a partir de 1 litro de cultivo en sólo dos pasos cromatográficos debido a la ausencia de otras proteínas contaminantes en las condiciones seleccionadas. Estos resultados permitirán diseñar estrategias para la producción en gran escala en sistemas de cultivo continuo con el fin de obtener esta bacteriocina en el orden de los miligramos para su aplicación en la preservación de alimentos y en estudios clínicos.