Evidencias bioquímicas de enzimas involucradas en el metabolismo de arginina en Phytomonas Jma

L. FRACCAROLI; MS. MARCORA; D. BALCAZAR; C. CARRILLO

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Phytomonas Jma es un parásito tripanosomátido que infecta gran variedad de plantas. En este trabajo avanzamos en el estudio de su metabolismo indagando en la presencia de las enzimas que utilizan Arginina como sustrato, enfocándonos en aquellas relacionadas al ciclo de arginina - ornitina: i- Arginina decarboxilasa (ADC), que produce agmatina y CO2: en ensayos de biosíntesis (in vivo e in vitro) utilizando arginina marcada, se liberó CO2 pero no se observó síntesis de agmatina; los niveles de CO2 no se modificaron en presencia de DFMA, inhibidor específico de ADC. Estas evidencias sugieren la ausencia de ADC en Phytomonas Jma. Paralelamente, mediante análisis in silico no se encontraron secuencias putativas de ADC ii- Óxido nítrico sintasa (NOS), que cataliza la formación de citrulina y NO: si bien no se llegó a detectar citrulina sintetizada a partir de arginina marcada (por técnicas electroforéticas), detectamos nitritos (por ensayo de Griess) en sobrenadantes de Phytomonas Jma en presencia de distintas concentraciones de arginina. Esto podría sugerir actividad de NOS, también sugerido por el hallazgo, mediante análisis bioinformático, de una secuencia con un 42% de identidad con la NOS de Leishmania infantum. iii- Arginasa, que produce ornitina y urea: la detección de ornitina y, consecuentemente putrescina, a partir de arginina marcada así como la disminución de la producción de urea y CO2 al incubar con el inhibidor NOHA, sugirieren la presencia de arginasa. Como históricamente se ha propuesto la ausencia de arginasa como marcador de especie de Phytomonas spp, este resultado puede resultar controversial. Sin embargo, a través de análisis bioinformáticos hallamos una secuencia putativa de arginasa, la cual será clonada y caracterizada funcionalmente como siguiente paso en este trabajo. En conclusión, estos estudios contribuyen al conocimiento de la biología de este tripanosomátido con impacto agrícola en economías regionales.