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TolT fue caracterizado como un antígeno flagelar de tripomastigotes de T. cruzi, codificadopor 3 genes casi idénticos, lo que no correlacionaba con la diversidad revelada en estudiosproteómicos posteriores. Recientemente obtuvimos el genoma de alta calidad de secuenciay ensamblado de la cepa RA. Este genoma, junto a otros pertenecientes a distintas cepas ykinetoplástidos relacionados disponibles en bases de datos, fue aquí analizado con elobjetivo de profundizar en la caracterización genómica de TolT. Esto reveló una grancomplejidad genética (~20 genes distribuidos en 3 loci/cepa), y nos permitió delinear 3grupos robustos de genes llamados TolTA, B y C. Los 3 grupos presentan similar númerode copias, grado de identidad de secuencias y disposición muy conservada en todas lascepas analizadas. Análisis de expresión, localización y perfil antigénico de los productosTolT soportan la división propuesta y sugieren una correlación funcional. Predicciones insilico indican que todas las proteínas TolT poseen un péptido señal clivable en el extremoN-t seguido por una región madura con algunos motivos comunes: sitios aceptores deglicosilación, un motivo colicin-like y 2 residuos Cys posicionalmente conservados. Para lamayoría de ellos, además, se predice una señal de anclaje por GPI en su extremo C-t. Lamayoría de estas predicciones fueron confirmadas mediante técnicas bioquímicas. Paraanalizar la importancia de las Cys conservadas, se generaron moléculas simples y doblesmutantes y se realizaron ensayos in vivo e in vitro, que sugieren un rol de estos residuos enel ensamblado de oligómeros de TolT en la superficie de tripomastigotes. Por último, existenexcepciones a la disposición estructural descripta: un miembro TolTB carece de la señal deanclaje por GPI. Esto resulta de sumo interés ya que se encuentra conservado en todas lascepas analizadas y sería una herramienta apropiada para el estudio del tráfico intracelularde proteínas en T. cruzi.