IIBIO   27936
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOTECNOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización fenotípica de mutantes por deleción para TSSA (Trypomastigote Small Surface Antigen) de Trypanosoma cruzi
Autor/es:
RODRIGUEZ, MATÍAS EXEQUIEL; BALOUZ, VIRGINIA; BURASI, FLORENCIA; TEKIEL, VALERIA; CÁMARA, MARÍA DE LOS MILAGROS; BUSCAGLIA, CARLOS ANDRÉS
Lugar:
Virtual
Reunión:
Congreso; XXXII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2020
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Protozoología
Resumen:
TSSA es una proteína polimórfica de la superficie de T. cruzi, involucrada en la adhesión acélulas blanco previo a la internalización. Para estudiar el rol de esta molécula generamosmediante CRISPR/Cas9 parásitos de la cepa RA editados en el locus TSSA, compuesto por12 copias idénticas dispuestas en tándem. Obtuvimos 3 clones con diferentes genotipos: #3con deleción parcial del locus TSSA, #9 y #10 con deleción total del locus y de distintasregiones flanqueantes. Los clones #9 y #10 mostraron una infectividad menor (~50%) invitro (e in vivo en el caso del clon #9) y una menor transmigración en un modelo deesferoides celulares. En este trabajo se evaluó si este último fenotipo está relacionado condeficiencias en la motilidad de los clones editados. Para esto, realizamos ensayos demigración en medio líquido y matrices semisólidas de colágeno tipo I. Se grabaron videos yusando un software específico se realizó el seguimiento manual de los parásitos cuadro porcuadro. En ninguna condición vimos diferencias significativas entre los clones y la cepa RAwt en los valores de velocidad obtenidos ni en el tipo de movimientos. Por esto inferimosque TSSA no cumple un rol crucial en el movimiento mecánico del tripomastigote per sesino que la disminución de los niveles de transmigración de los clones #9 y #10 (TSSA KO)podría estar relacionada con deficiencias en su interacción con receptores en la superficiede las células o de la matriz. Para confirmar que la menor infectividad se debía a la edicióngénica de TSSA, realizamos complementación funcional. Genes para distintas isoformas deTSSA con un epítope FLAG (y resistentes a edición por Cas9) fueron sintetizados, clonadosen pTEX y transfectados en parásitos mutantes y RA wt. Ensayos de Western blot e IFIpermitieron verificar la correcta expresión de las TSSA ectópicas en epimastigotes de lasdistintas líneas, los cuales serán próximamente diferenciados in vitro a tripomastigotes yevaluados fenotípicamente.