Rol de los inhibidores de proteasas de Salmonella Typhimurium en la interacción hospedador patógeno

BRUNO LAURA; MCCLELLAND MICHAEL; CORIA LORENA; POL MELINA; CASSATARO JULIANA; SAPOSNIK LUCAS; PANDOLFI JULIETA; PASQUEVICH KARINA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019

Asociación Argentina de Microbiología, Sociedad Argentina de Microbiología General

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOSCasi todos los agentesinfecciosos (virus, bacterias, hongos y parásitos) ingresan al hospedador através de mucosas. La mucosa intestinal es la interfaz más extensa entre elambiente externo y los tejidos del cuerpo humano. La primera línea de defensa del tractogastrointestinal se encuentra en el lumen intestinal, donde los microorganismosson degradados de forma no específica por el pH y secreciones gástricas,biliares y pancreáticas. Nuestra hipótesis es que Salmonella sintetiza inhibidores deproteasas no solo para regular la actividad de proteasas endógenas, usualmenteasociadas a su virulencia, sino además para poder enfrentarse al sistema dedefensa proteolítico del hospedador. Nuestro objetivo general es estudiar elrol de los inhibidores de proteasas de Salmonellaen la interacción hospedador-patógeno en la mucosa gastrointestinal. MATERIALESY MÉTODOSUtilizando MEROPS se realizó un análisis in silico sobre el genoma de Salmonella y se encontraron 4 familiasde inhibidores de proteasas. Para el estudio in vivo de la colonización intestinal y el desarrollo de colitis se utilizó el modelo de pre-tratamientocon estreptomicina en ratones. Luego, los animales fueron infectados por víaoral con las distintas cepas de Salmonellacontrol o delecionadas en los genes para los inhibidores de proteasas (knock-out). Se realizaron análisishistopatológicos de cortes del cecum de los ratones, teñidos con hematoxilina yeosina. También se realizaron ensayos de invasión en la línea celular demacrófagos murinos J774, así como también en macrófagos derivados de médula óseade ratón. El análisis estadístico se realizó utilizando el programa GraphPadPrism 7.RESULTADOSLuego de la infecciónpor vía oral de los ratones pre-tratados con estreptomicina usando la cepasalvaje (WT), el cecum de los mismos se vuelve marchito, reducido en tamaño ypeso, pálido y lleno de exudado purulento. Además, lleva a cambioshistopatológicos en el cecum de los ratones: edema pronunciado en la submucosa,cambios edematosos en la lámina propria, elongación de la cripta, ruptura de laestructura de la cripta, reducido número de células de Goblet, erosiónepitelial y/o ulceración e infiltración pronunciada de granulocitospolimorfonucleares (PMNs) en la submucosa, lamina propria, pared epitelial, asícomo también transmigración de PMNs en el lumen intestinal. Mientras que seobserva un fenotipo atenuado luego de la infección vía oral con las cepas de Salmonella knock-out para inhibidores de proteasas para producir reducción deltamaño y peso del cecum, y los cambios histopatológicos mencionados. Ensayos deinvasión en la línea celular J774 de macrófagos murinos y en macrófagosderivados de médula ósea de ratón (BMDM) demostraron que las cepas knock-out en inhibidores de proteasastienen una capacidad reducida para invadir respecto de la cepa WT. CONCLUSIONESEstos resultadossugieren que los inhibidores de proteasas podrían contribuir a la patogénesisde Salmonella Typhimurium y eldesarrollo de colitis in vivo.