Caracterizacion bioquimica y molecular de las proteinas TolT de Trypanosoma cruzi

LOBO MAITE MABEL; CARLOS A BUSCAGLIA; CAMARA MARIA DE LOS MILAGROS; VIRGINIA BALOUZ

Resistencia

Congreso; XXX Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2018

Sociedad Argentina de Parasitologia

TolT fue caracterizado originalmente como un antgeno agelar de tripomastigotes de Trypanosoma cruzi,codicado por un reducido numero de genes homologos dispuestos en tandem. Posteriormente, se determinoque era blanco de una fuerte respuesta inmune celular y humoral en animales, por lo que se evaluo su potencialcomo candidato vacunal y reactivo para serodiagnostico. Busquedas en bases de datos mas recientesrevelaron una mayor complejidad para los genes TolT en tripanosomatidos, tal que agrupamos sus secuencias,en 3 subfamilias llamadas TolT-A, TolT-B y TolT-C. Se procedio con la caracterizacion preliminar deestas subfamilias, determinandose que, estructuralmente, con algunas excepciones, sus miembros poseen unpeptido se~nal clivable en el extremo N-terminal seguido por una region madura mas conservada con algunosmotivos y residuos Cys conservados y una se~nal de anclaje por GPI en su extremo C-terminal; ademasTolT-A y B son muy similares entre s hacia su region C-terminal (desde aa 180), mientras que TolT-Cdiverge globalmente de estas. Sin embargo, a pesar del alto grado de similitud estructural entre secuencias,tanto sus perles de expresion a nivel de ARN y protena a lo largo del ciclo de vida del parasito como losantigenicos son diferentes, fundamentando la agrupacion en subfamilias. Recientemente, nos adentramos enun analisis mas exhaustivo con el objetivo de iniciar una futura caracterizacion funcional de TolT. En primerlugar la secuenciacion del genoma de TCC, cepa hbrida de igual linaje que CL Brener, permitio denir ladisposicion de las secuencias en el genoma. Luego ampliamos la caracterizacion proteica a nivel subcelular,donde observamos que, en tripomastigotes, la localizacion de las 3 subfamilias se extiende a lo largo de lasupercie del agelo mientras que en amastigotes cada una de ellas se restringe a regiones discretas particulares.Ademas, exploramos el posible rol estructural de 2 residuos Cys presentes en la region madura de todoslos productos TolT, determinando que in vivo solamente TolT-B se ensambla en oligomeros (posiblementetrmeros) en la supercie de tripomastigotes y que estos se enlazan por enlaces covalentes intermoleculares.Finalmente, extendimos el analisis del perl antigenico a otras especies con el cual conrmamos lo observadoen humanos: TolT es un importante target durante la infeccion por T. cruzi y su reconocimiento pareceestar dirigido hacia el extremo C-terminal comun a TolT-A y B.