Expresión en plantas de un antígeno quimérico de la bacteria STEC, agente causal del Síndrome Urémico Hemolítico

RAMOS DUARTE, V.A; MENDOZA MORALES, L.F.; CORIGLIANO, M.G.; SANDER, V.A.; SANCHEZ-LOPEZ, EDWIN; CLEMENTE, M.

on-line

Jornada; II Jornada de Jóvenes Bionanocientificxs; 2020

Expresión en plantas de un antígeno quimérico de la bacteria STEC, agentecausal del Síndrome Urémico HemolíticoUnidad de Biotecnología 6-UB6, IIB-INTECH, CONICET-UNSAM, Intendente Marino Km 8.2, B7130IWA Chascomús, Buenos Aires Provincia,Argentina. E-mail de contacto: varamosd@intech.gov.ar.En Argentina, el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es causado principalmente por el serotipo 0:157 H:7 de la Toxina Shiga Escherichia coli ? (STEC) y representa la principal causa de insuficiencia renal aguda e hipertensión arterial en lactantes y niños y la segunda causa de insuficiencia renal crónica y de trasplante renal. El empleo de adyuvantes en el diseño de vacunas a subunidades permite potenciar la respuesta inmune inducida por el antígeno. En nuestro laboratorio hemos estudiado la función de las proteínas HSP90 de plantas (proteínas de choque térmico de 90- kDa) como carriers y adyuvantes (Corigliano et al., 2013, Sánchez-López et al., 2019). Nuestro trabajo propone expresar transitoriamente en plantas de tabaco y establemente en plantas de lechuga (transgénica) el antígeno quimérico derivado de lasproteínas EspA, Intimina y Tir (EIT; EspA36-192-Intimin653-935-Tir258-361) de la bacteria E. coli STEC fusionado adiferentes isoformas de la familia de las Hsp90 de plantas con el objeto de evaluar a las Hsp90 como carriers/adyuvantes en este modelo de infección. Dado que los epítopes EIT fueron efectivos en la protección contra la infección con STEC (Iannino et al., 2015), en el presente trabajo hemos diseñado estrategias para fusionar la proteína quimérica EIT a dos isoformas de las Hsp90 de plantas: Hsp81.2 de Arabidospis thaliana (AtHsp81.2) y Hsp90.3 de Nicotiana benthamiana (NbHsp90.3). Además, se obutvo una construcción con la proteína quimérica EIT sola. Mediante la tecnología Gateway se obtuvieron las tres construcciones: p35S:GATFH-AtHsp81.2-EIT, p35S:GATFH-NbHsp90.3 y p35S:GATFH-EIT, las cuales se usaron para transformar la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens: Para verificar la correcta inserción de los fragmentos cada construcción fue secuenciada, digerida con enzimas de restricción y amplificada por PCR. Con las bacterias A. tumefaciens recombinante se procederá a realizar de expresión transitoria por agroinfiltración con las construcciones obtenidas en plantas de tabaco y la optimización delos parámetros de cultivo.REFERENCIASCorigliano, M. G., Fenoy, I., Sander, V., Maglioco, A., Goldman, A., & Clemente, M. (2013). Plant HeatSchok Protein 90 as carrier-adjuvant for inmunization against a reporter antigen. Vaccine, 31(49), 5872-5878.Iannino, F., Hermann, C. K., Roset, M. S., & Briones, C. G. (2015). Development of a dual vaccine forprevention of Brucella abortus infecton and Escherichia coli O157:H7 intestinal colonization. Vaccine, 2248-2253.Sánchez-López, E. F., Corigliano, M. G., Albarracín, R. M., Sander, V. A., Legarralde, A., Bengoa-Luoni, S. A.,En Argentina, el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es causado principalmente por el serotipo 0:157 H:7de la Toxina Shiga Escherichia coli ? (STEC) y representa la principal causa de insuficiencia renal aguda ehipertensión arterial en lactantes y niños y la segunda causa de insuficiencia renal crónica y de trasplanterenal. El empleo de adyuvantes en el diseño de vacunas a subunidades permite potenciar la respuestainmune inducida por el antígeno. En nuestro laboratorio hemos estudiado la función de las proteínasHSP90 de plantas (proteínas de choque térmico de 90- kDa) como carriers y adyuvantes (Corigliano et al.,2013, Sánchez-López et al., 2019). Nuestro trabajo propone expresar transitoriamente en plantas detabaco y establemente en plantas de lechuga (transgénica) el antígeno quimérico derivado de lasproteínas EspA, Intimina y Tir (EIT; EspA36-192-Intimin653-935-Tir258-361) de la bacteria E. coli STEC fusionado adiferentes isoformas de la familia de las Hsp90 de plantas con el objeto de evaluar a las Hsp90 comocarriers/adyuvantes en este modelo de infección. Dado que los epítopes EIT fueron efectivos en laprotección contra la infección con STEC (Iannino et al., 2015), en el presente trabajo hemos diseñadoestrategias para fusionar la proteína quimérica EIT a dos isoformas de las Hsp90 de plantas: Hsp81.2 deArabidospis thaliana (AtHsp81.2) y Hsp90.3 de Nicotiana benthamiana (NbHsp90.3). Además, se obutvouna construcción con la proteína quimérica EIT sola. Mediante la tecnología Gateway se obtuvieron lastres construcciones: p35S:GATFH-AtHsp81.2-EIT, p35S:GATFH-NbHsp90.3 y p35S:GATFH-EIT, las cuales seusaron para transformar la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens: Para verificar la correctainserción de los fragmentos cada construcción fue secuenciada, digerida con enzimas de restricción yamplificada por PCR. Con las bacterias A. tumefaciens recombinante se procederá a realizar de expresióntransitoria por agroinfiltración con las construcciones obtenidas en plantas de tabaco y la optimización delos parámetros de cultivo.REFERENCIASCorigliano, M. G., Fenoy, I., Sander, V., Maglioco, A., Goldman, A., & Clemente, M. (2013). Plant HeatSchok Protein 90 as carrier-adjuvant for immunization against a reporter antigen. Vaccine, 31(49), 5872-5878.Iannino, F., Hermann, C. K., Roset, M. S., & Briones, C. G. (2015). Development of a dual vaccine for prevention of Brucella abortus infection and Escherichia coli O157:H7 intestinal colonization. Vaccine,2248-2253.Sánchez-López, E. F., Corigliano, M. G., Albarracín, R. M., Sander, V. A., Legarralde, A., Bengoa-Luoni, S. A., & Clemente, M (2019) Plant Hsp90 is a novel adjuvant that elicits a strong humoral and cellular immune response against B-and T-cell epitopes of a Toxoplasma gondii SAG1 peptide. Parasites & vectors, 12(1),140.