Evaluación de la capacidad inmunogénica de una vacuna novel de tipo DIVA contra la neosporosis en bovinos.

MENDOZA MORALES, L.F.; SANCHEZ-LOPEZ, EDWIN; CHEUQUEPAN, F.; RAMOS DUARTE, V.A; CLEMENTE, M.; LAGORIO, V; CIRONE, K.; HECKER, Y; MOORE, P.D.; FIORANI, F; CORIGLIANO MG; MALDONADO, J.; CANTÓN, G.; SANDER, V.A.

La Plata

Congreso; XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Neospora caninum es el agente etiológico de la neosporosis, una enfermedad infecciosa mundialmente reconocida como la principal causa de abortos y fallas reproductivas en bovinos. Actualmente no existen tratamientos quimioterapéuticos ni vacunas contra la neosporosis. Un abordaje novedoso, es el de las vacunas ?DIVA? (del inglés differentiate infected from vaccinated animals). En un trabajo previo de nuestro laboratorio demostramos en un modelo murino de neosporosis congénita que la inmunización de ratones BALB/c con una formulación vacunal recombinante novel tipo DIVA, conteniendo el Ag de superficie SAG1 de N. caninum (rNcSAG1) y la proteína de choque térmico de 90 kDa de Arabidopsis thaliana (rAtHsp81.2) como adyuvante, generó no sólo IgGt anti-rNcSAG1 sino también IgGt anti-rAtHsp81.2, y otorgó protección parcial contra infección y la transmisión vertical del patógeno. Teniendo en cuenta estos antecedentes nos propusimos determinar si la formulación vacunal propuesta funciona como una vacuna DIVA también en la especie de interés, Bos taurus. Con el fin de evaluar la capacidad inmunogénica de la formulación vacunal propuesta, 21 vaquillonas libres de neosporosis fueron divididas en 6 grupos, a los que se les administró, según correspondiera 2 dosis de cada una de las siguientes formulaciones mediante una inyección subcutánea los 0 y 30 días post inmunización (d.p.i.): (A): 50 g de rNcSAG1 + 150 g rAtHsp81.2 (n=4); (B): 200 g de rNcSAG1 + 600 g rAtHsp81.2 (n=4); (C): 500 g de rNcSAG1 + 1500 g rAtHsp81.2 (n=4);. (D): 150 g rAtHsp81.2 (n=3); (E):1500 g g de rAtHsp81.2 (n=3); (F): control vehículo (sólo 3 ml de PBS; n=3). Se colectaron muestras de sangre (40 ml) de la vena yugular para evaluar la respuesta inmune humoral a los 0 (pre-inmune), 30 (pre-boost), 45, 60 y 90 d.p.i. Se recuperó el suero, que fue utilizado para realizar la determinación del título de inmunoglobilinas G totales (IgGt) anti-rNcSAG1 y anti-rAtHsp81.2 y los isotipos IgG1 e IgG2 anti-rNcSAG1. Por otro lado, con el objetivo de evaluar la respuesta celular se colectó sangre con heparina a los 60 d.p.i. de todos los animales, a partir de la que se obtuvieron las células mononucleares de sangre periférica (CMSP), que fueron cultivadas en medio DMEM en presencia/ausencia del Ag. (rNcSAG1) por 72 hs. Posteriormente se recuperaron los sobrenadantes del cultivo celular para la determinación de secreción de IFN- por Elisa. Los sueros de los animales que recibieron las dosis media (grupo B) y alta (grupo C) de la formulación vacunal mostraron altos títulos de anticuerpos IgGt e IgG2 anti-rNcSAG1 desde los 30 d.p.i. en adelante, alcanzando valores máximos a los 60 d.p.i. Los animales que recibieron la menor dosis de la formulación vacunal (A) y aquellos correspondientes a los controles de dosis de adyuvante (D y E) o vehículo (F) no mostraron anticuerpos anti-rNcSAG1. No fue posible detectar títulos de IgG1 anti-rNcSAG1 en ninguna de las muestras. Por otro lado, todos los animales a los que se les administró el adyuvante solo (D y E) o en conjunto con el Ag. (A, B y C) mostraron títulos de IgGt anti-rAtHsp81.2, obteniéndose los mayores valores a los 60 d.p.i. para los grupos que recibieron la mayor dosis de adyuvante (C y E). Respecto de la respuesta inmune celular, la estimulación con el Ag. de las CMSP provenientes de los animales inmunizados con la mayor dosis de la formulación vacunal (C) indujo la secreción de niveles de IFN- significativamente mayores a los del grupo vehículo (F). En conclusión, la inmunización de vaquillonas con la dosis más alta de la formulación vacunal de tipo DIVA conteniendo el Ag. rNcSAG1 y como adyuvante la proteína rAtHsp81.2 es capaz de generar una importante respuesta inmune humoral con la secreción de IgGt e IgG2 anti- rNcSAG1, así como también de promover la respuesta inmune celular, mediada por la producción de IFN-. Estos resultados nos alientan a evaluar su capacidad inmunoprotectora durante la preñez bovina.