Expresión en plantas de un antígeno quimérico de la bacteria STEC, agente causal del Síndrome Urémico Hemolítico

EDWIN SÁNCHEZ LÓPEZ; CORIGLIANO, MARIANA G.; RAMOS DUARTE, VICTOR A.; MENDOZA MORALES, LUISA

BUENOS AIRES

Congreso; II JORNADA DE JÓVENES BIONANOCIENTÍFICXS (JoBioN); 2020

JOBION

En Argentina, el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es causado principalmente por el serotipo 0:157 H:7de la Toxina Shiga Escherichia coli ? (STEC) y representa la principal causa de insuficiencia renal aguda e hipertensión arterial en lactantes y niños y la segunda causa de insuficiencia renal crónica y de trasplante renal. El empleo de adyuvantes en el diseño de vacunas a subunidades permite potenciar la respuesta inmune inducida por el antígeno. En nuestro laboratorio hemos estudiado la función de las proteínas HSP90 de plantas (proteínas de choque térmico de 90- kDa) como carriers y adyuvantes (Corigliano et al., 2013, Sánchez-López et al., 2019). Nuestro trabajo propone expresar transitoriamente en plantas detabaco y establemente en plantas de lechuga (transgénica) el antígeno quimérico derivado de las proteínas EspA, Intimina y Tir (EIT; EspA36-192-Intimin653-935-Tir258-361) de la bacteria E. coli STEC fusionado a diferentes isoformas de la familia de las Hsp90 de plantas con el objeto de evaluar a las Hsp90 como carriers/adyuvantes en este modelo de infección. Dado que los epítopes EIT fueron efectivos en la protección contra la infección con STEC (Iannino et al., 2015), en el presente trabajo hemos diseñadoestrategias para fusionar la proteína quimérica EIT a dos isoformas de las Hsp90 de plantas: Hsp81.2 de Arabidospis thaliana (AtHsp81.2) y Hsp90.3 de Nicotiana benthamiana (NbHsp90.3). Además, se obutvo una construcción con la proteína quimérica EIT sola. Mediante la tecnología Gateway se obtuvieron las tres construcciones: p35S:GATFH-AtHsp81.2-EIT, p35S:GATFH-NbHsp90.3 y p35S:GATFH-EIT, las cuales se usaron para transformar la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens: Para verificar la correctainserción de los fragmentos cada construcción fue secuenciada, digerida con enzimas de restricción y amplificada por PCR. Con las bacterias A. tumefaciens recombinante se procederá a realizar de expresióntransitoria por agroinfiltración con las construcciones obtenidas en plantas de tabaco y la optimización delos parámetros de cultivo.