II JORNADA DE JÓVENES BIONANOCIENTÍFICXS

RAMOS DUARTE A; MENDOZA MORALES LUISA FERNANDA; CORIGLIANO M; SANDER V; SANCHEZ E; CLEMENTE M

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; II JORNADA DE JÓVENES BIONANOCIENTÍFICXS; 2020

Instituto de Nanosistemas UNSAM

En Argentina, el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es causado principalmente por el serotipo 0:157 H:7de la Toxina Shiga Escherichia coli ? (STEC) y representa la principal causa de insuficiencia renal aguda ehipertensión arterial en lactantes y niños y la segunda causa de insuficiencia renal crónica y de trasplanterenal. El empleo de adyuvantes en el diseño de vacunas a subunidades permite potenciar la respuestainmune inducida por el antígeno. En nuestro laboratorio hemos estudiado la función de las proteínasHSP90 de plantas (proteínas de choque térmico de 90- kDa) como carriers y adyuvantes (Corigliano et al.,2013, Sánchez-López et al., 2019). Nuestro trabajo propone expresar transitoriamente en plantas detabaco y establemente en plantas de lechuga (transgénica) el antígeno quimérico derivado de lasproteínas EspA, Intimina y Tir (EIT; EspA36-192-Intimin653-935-Tir258-361) de la bacteria E. coli STEC fusionado adiferentes isoformas de la familia de las Hsp90 de plantas con el objeto de evaluar a las Hsp90 comocarriers/adyuvantes en este modelo de infección. Dado que los epítopes EIT fueron efectivos en laprotección contra la infección con STEC (Iannino et al., 2015), en el presente trabajo hemos diseñadoestrategias para fusionar la proteína quimérica EIT a dos isoformas de las Hsp90 de plantas: Hsp81.2 deArabidospis thaliana (AtHsp81.2) y Hsp90.3 de Nicotiana benthamiana (NbHsp90.3). Además, se obutvouna construcción con la proteína quimérica EIT sola. Mediante la tecnología Gateway se obtuvieron lastres construcciones: p35S:GATFH-AtHsp81.2-EIT, p35S:GATFH-NbHsp90.3 y p35S:GATFH-EIT, las cuales seusaron para transformar la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens: Para verificar la correctainserción de los fragmentos cada construcción fue secuenciada, digerida con enzimas de restricción yamplificada por PCR. Con las bacterias A. tumefaciens recombinante se procederá a realizar de expresióntransitoria por agroinfiltración con las construcciones obtenidas en plantas de tabaco y la optimización delos parámetros de cultivo.