Evidencias Iniciales de TGFBR2-SE Como Posible Blanco Terapéutico y Biomarcador De Actividad De Artritis Reumatoidea

MATIAS ADAN PREISEGGER; RICARDO A. DEWEY; JORGE VELASCO ZAMORA

Mendoza

Congreso; 51° Congreso Argentino de Reumatología; 2018

Sociedad Argentina de Reumatología

Evidencias iniciales de TGFBR2-SE como posible blanco terapéutico y biomarcador de Actividad de artritis reumatoidea.Preisegger M; Velasco Zamora J; Dewey RINSTITUCIONES: INTECH, (CONICET-UNSAM), Chascomús, Argentina; Instituto Médico CER, Fundación Articular, Quilmes, Argentina.INTRODUCCIÓN: En artritis reumatoidea (AR), TGF-β ejerce un efecto singular sobre las células del sistema immune, sobre todo sobre los neutrofilos, actuando sobre ellos para reclutarlos hacia la articulación enferma donde son expuestos a una amplia variedad de citoquinas locales proinflamatorias. Estas citoquinas ejercen profundos efectos sobre la capacidad de los neutrófilos para responder a factores del microambiente local. El TGF-β en el medio extracellular interacciona inicialmente con el receptor tipo II de TGF-β (TGFBR2) para luego iniciar una cascada de reacciones que permiten estimular o inhibir la expression de ciertos genes en el núcleo celular. Recientemente, hemos descubierto una nueva isoforma de dicho receptor a la que denominamos TGFBR2-SE (soluble endógena), pero su participación en la patofisiología de AR es aún desconocida.OBJETIVO: Obtener información acerca de TGFBR2-SE y su potencial participación en AR, mediante la evaluación de los niveles intracelulares de esta proteína en neutrófilos de pacientes con distintos grados de actividad de la enfermedad.MATERIALES Y MÉTODOS: Se obtuvo sangre periférica por flebotomía de 19 pacientes con AR (ACR/EULAR 2010) con distintos grados de actividad de la enfermedad determinado por DAS28-ESR con tres parámetros. Los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Ética en Investigación del Instituto Médico CER y luego de la firma de consentimiento informado. Tanto neutrófilos como células mononucleares (monocitos y linfocitos) fueron purificadas mediante centrifugación en gradiente de Ficoll-PaqueTM PLUS. Para determinar el porcentaje de células que expresan la proteína TGFBR2-SE, 1 x 106 neutrófilos o células mononucleares fueron fijadas y permeabilizadas utilizando el kit Cytofix/Cytoperm, para identificar la proteína intracelular. Posteriormente, las células fueron incubadas con 0,5 μg de anticuerpo monoclonal anti-TGFBR2-SE conjugado con el fluorocromo ATTO647N. El porcentaje de neutrófilos expresando la proteína TGFBR2-SE fue cuantificado mediante inmunofluorescencia por citometría de flujo en un analizador celular FACSCalibur (Becton Dickinson), tomando como valor de referencia basal la máxima fluorescencia obtenida en la población linfocitaria de cada paciente. Los valores de porcentaje de neutrófilos conteniendo TGFBR2-SE fueron correlacionados con el DAS28-ESR de cada paciente mediante el test de Spearman del software OriginPro 8.5.1.RESULTADOS: en este trabajo se pudo observar que los porcentajes de neutrófilos expresando TGFBR2-SE en pacientes con AR es variable, y que esas variaciones se correlacionan negativamente (coeficiente de Spearman rs= -0,69, valor p= 0,0009), con la actividad de la enfermedad determinada por DAS28-ESR.DISCUSIÓN: La correlación negativa aquí encontrada entre el porcentaje de neutrófilos expresando TGFBR2-SE y la actividad de AR brinda evidencias iniciales acerca de variaciones de esta proteína en la enfermedad, que podría ser utilizada como blanco para el desarrollo de nuevos tratamientos terapéuticos. Nuestro descubrimiento también brinda evidencias preliminaries de que la evaluación de los niveles de TGFBR2-SE en neutrófilos podría representar un método alternativo al DAS28 para la determinación de actividad de los pacientes con AR.