N-myc downstream regulated gene-1b (ndrg1b) regula la proliferación Tipo II de las células germinales primordial en medaka.

ARIAS PADILLA, L.F.; FERNANDINO, J.I.

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

Durante la determinación sexual gonadal los primordios gonadales adquieren características sexo específicas. Inicialmente las células germinales primordiales (PGCs) migran al primordio gonadal, y proliferan mitóticamente en forma lineal (tipo I) en ambos sexos. Luego las PGCs se enfrentan a la decisión crítica de permanecer en tipo I o entrar en una proliferación sincrónica y sucesiva (tipo II), para ingresar luego a la meiosis y diferenciarse como oocito o esperma. El primer dimorfismo sexual se observa cuando las PGCs en los primordios gonadales XX experimentan esta división exponencial y se agrupan en quistes de 8-64 células germinales premeióticas, llamados cunas. En las gónadas XY, la proliferación de tipo II ocurre más tarde, alrededor de 20 días después de eclosión, en donde las PGCs proliferan formando cistos. Estas proliferaciones de células germinales tipo II durante el desarrollo son cruciales para el éxito reproductivo, sin embargo, aún son poco entendidas a nivel molecular. En el presente trabajo observamos que el gen ndrg1b, se expresa en la gónada durante el desarrollo embrionario del pez medaka (Oryzias latipes), y su expresión es diferencial entre sexos en los momentos clave de transición de la proliferación tipo I a tipo II de las PGCs en ambos sexos. Luego, para estudiar el rol de ndrg1b en este proceso, generamos mutaciones bialélicas con la técnica CRISPR/Cas9, observando una disminución de la proliferación tipo II en ambos sexos, por el menor número de cunas y cistos, y a su vez una disminución del número de PGCs en ambas estructuras. La proliferación de tipo I no se vio afectada. Para corroborar si esta ausencia de proliferación de tipo II era debido a muerte celular realizamos un estudio de TUNNEL, no observándose PGCs en apoptosis. Adicionalmente, cuando estos individuos alcanzaron la etapa reproductiva presentaron una disminución de los parámetros de fertilidad, en el caso de las hembras observamos una disminución del número de huevos desovados, y en machos bajo porcentaje de fecundación y eclosión. Estos resultados indican que ndrg1b estaría involucrado en la proliferación tipo II durante el desarrollo gonadal en ambos sexos.