Cápsides vacías del virus de la fiebre aftosa serotipo A/Arg/2001 estimulan células del sistema inmune bovino in vitro de manera similar al virus inactivo

MIGNAQUI, AC; LANGELLOTTI, C; GAMMELLA, M; QUATTROCCHI, V; WIGDOROVITZ, A; BIDART, J; ZAMORANO, P; RUIZ, V; SORIA, IVANA; ANGELLETTI, PAMELA

La Plata

Jornada; XII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

El virus de la Fiebre Aftosa (VFA) es un grave problema para las economías regionales, dado que impone importantes restricciones al comercio internacional. Las vacunas que se utilizan actualmente para el control de la enfermedad se formulan con virus inactivo. Para producir la vacuna se deben infectar grandes cantidades de cultivos celulares susceptibles con virus infeccioso que luego son inactivados químicamente. Entre las desventajas de este tipo de producción pueden mencionarse: la necesidad de contar con costosas instalaciones de bioseguridad, el riesgo de escape viral y de inactivación incompleta y las dificultades para discriminar animales infectados de vacunados. Para revertir estos inconvenientes se intentan desarrollar vacunas más seguras y efectivas contra la enfermedad. Las cápsides vacías recombinantes son una alternativa promisoria, ya que contienen todos los sitios antigénicos del virus sin el material genético infeccioso.Mignaqui y colaboradores (2013) han desarrollado cápsides vacías del VFA serotipo A/ARG/2001 (A2001) en un sistema de expresión transitorio en células de mamífero, que han demostrado ser inmunogénicas e incluso protectivas en el modelo murino. Sin embargo, aún no se ha probado su eficacia en bovinos.Las células dendríticas (CDs) juegan un rol central en la inmunidad. Son las únicas capaces de presentar antígenos a los linfocitos T vírgenes y deciden el destino de la inmunidad adaptativa. Charleston y colaboradores (2006), han desarrollado una técnica para canular vasos linfáticos en bovinos, que permite recolectar las CDs que migran por linfa (ALDCs, del inglés Afferent lymph dendritic cells). En nuestro grupo de trabajo, luego de realizar un entrenamiento con el Dr. Charleston, fuimos capaces de canular los vasos aferentes de un ternero y obtener ALDCs.El objetivo del trabajo es comparar in vitro cómo las cápsides vacías de VFA del serotipo A/ARG/2001 impactan sobre células del sistema inmune del bovino en relación con el virus inactivo.Las ALDCs bovinas fueron incubadas con el virus inactivo, cápsides vacías o medio de cultivo con células de mamífero sin transfectar (control mock). Luego, la regulación de las moléculas co-estimulatorias CD40, CD86 y MHCII, sobre la superficie de las ALDCs se midió por marcación de las mismas con anticuerpos monoclonales conjugados con fluorocromos. Asimismo se midió la capacidad de las ALDCs cargadas con virus inactivo, cápsides vacías o mock para despertar la respuesta anamnésica de células de sangre periférica del mismo animal, mediante la medición de la proliferación, por la técnica de pérdida del colorante éster de succinimidil-carboxifluoresceína (CFSE).En el presente trabajo demostramos que tanto el virus inactivo como las cápsides vacías incrementan la expresión de las moléculas co-estimuladoras y producen la proliferación de células de sangre periférica en porcentajes similares. De esta manera concluimos que las cápsides vacías de VFA serotipo A/ARG/01, estimulan una respuesta inmune in vitro sobre células bovinas que se correspondería con una respuesta clásica de estimulación T-dependiente, similar a la producida por el virus inactivo y por lo tanto son un buen candidato vacunal que podría ser evaluado con éxito en bovinos.