Edición de base en el codón Pro197 del gen de la acetolactato sintasa de lechuga: resultados preliminares

BERACOCHEA, VALERIA; RADONIC, LAURA M.; LÓPEZ BILBAO, MARISA; DARQUI, FLAVIA S.; HOPP, H. ESTEBAN

Modalidad Virtual

Congreso; XLVIII CONGRESO ARGENTINO DE GENÉTICA 2020; 2020

Sociedad Argentina de Genética

En distintas especies vegetales, mutaciones específicas en el gen de la acetolactato sintasa (ALS) conducen a sustituciones de aminoácidos que confieren resistencia a herbicidas. La sustitución espontánea de Pro197 por His en el gen ALS de L. serriola (lechuga salvaje) generó resistencia a sulfonilureas e imidazolinonas que por cruzamiento pudo transferirse a lechuga cultivada (L. sativa). Nuestro objetivo es establecer la edición génica en lechuga por edición de base, modificando el codón Pro197 del gen ALS (LsALS) con cambios C por T que lo sustituyen por Ser197 o Leu197. Este trabajo describe la selección y armado del vector de edición, y su delivery por transformación genética. Mediante amplificación por PCR se logró identificar la región target de LsALS y se comprobó la ausencia de variantes alélicas. Se evaluó el número de potenciales off targets por análisis in sílico. Para la construcción del vector de edición se partió del plásmido pXSE901BG (Addgene), confirmando su identidad por antibiograma, PCR y análisis de perfiles de restricción. En el vector se reemplazó el cassette de resistencia a fosfinotricina por otro de resistencia a kanamicina y se incorporó la secuencia espaciadora del gRNA. Por PCR y secuenciación se confirmó la inserción de una única secuencia espaciadora en la posición y dirección correcta. Por último, se trasformó establemente la var. Grand Rapids de lechuga. Se obtuvieron 8 eventos diferentes, con una eficiencia del 6%, similar a la lograda previamente con otros vectores.