Validación de genes de referencia para qPCR en sorgo de Alepo resistente a glifosato

MUÑIZ, ESTEBAN; DANIELA TOSTO; NOELIA ULRICH,; ESTEBAN HOPP; A; CORACH,

Buenos Aires

Congreso; XLVIII Congreso Argentino de Genética, virtual; 2020

SAG Sociedad Argentina de Genética

Las malezas son una de las principales causas de la disminución del rendimiento de los cultivos, entre ellas el sorgo de Alepo es una de las de mayor impacto. La PCR en tiempo real o PCR cuantitativa es la técnica de elección para el estudio de expresión de genes dada su alta procesividad y confiabilidad, pero su precisión a la hora de las cuantificaciones es muy dependiente de la estabilidad de los genes de referencia. Un gen de referencia adecuado debería expresarse en forma estable en todas las condiciones experimentales a analizar. El objetivo del presente trabajo es evaluar la estabilidad de diferentes genes de referencia para sorgo de Alepo resistente a glifosato. Para ello se evaluaron genes utilizados regularmente como referencia (ACT, ALS, PP2A, EIF4 y ARI8) bajo condiciones de aplicación de glifosato y se analizó su expresión a las 0, 24 y 72 horas postaplicación en biotipos susceptibles y resistentes. Se diseñaron oligonucleótidos con el software Primers 3 y se verificó la especificidad de los mismos analizando las secuencias de los fragmentos amplificados y las curvas de disociación; así como también se calculó la eficiencia de cada uno, E= 101/pendiente. Para el análisis de estabilidad se utilizaron los softwares Genorm, Normfinder, BestKeeper y método del ΔCt. La variación de los Ct fue desde un mínimo de 21,93 a un máximo de 28,24. Para el Bestkeeper los genes con menor variación fueron ARI8 y PP2A. Tanto para el algoritmo del Genorm y el Normfider los genes ARI8 y PP2A fueron los más estables bajo las condiciones de ensayo.