Edición de base en el codón Pro197 del gen de la acetolactato sintasa de lechuga: resultados preliminares

DARQUI, FLAVIA; LOPEZ BILBAO M.; HOPP H ESTEBAN; RADONIC, LAURA M.; BERACOCHEA VALERIA

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Congreso; XLVIII CONGRESO ARGENTINO DE GENÉTICA 2020; 2020

SAG Sociedad Argentina de Genetica

En distintas especies vegetales, mutacionesespecíficas en el gen de la acetolactato sintasa (ALS) conducen a sustituciones de aminoácidos que confierenresistencia a herbicidas. La sustitución espontánea de Pro197 por His en el genALS de L. serriola (lechuga salvaje) generó resistencia a sulfonilureas eimidazolinonas que por cruzamiento pudo transferirse a lechuga cultivada (L. sativa). Nuestro objetivo esestablecer la edición génica en lechuga por edición de base, modificando elcodón Pro197 del gen ALS (LsALS) con cambios C por T que losustituyen por Ser197 o Leu197. Este trabajo describe la selección y armado delvector de edición, y su delivery portransformación genética. Mediante amplificación por PCR se logró identificar laregión target de LsALS y se comprobó la ausencia de variantes alélicas. Se evaluó el número depotenciales off targets por análisis in sílico. Para laconstrucción del vector de edición se partió del plásmido pXSE901BG(Addgene), confirmando su identidad por antibiograma, PCR y análisis deperfiles de restricción. En el vector se reemplazó el cassette de resistencia afosfinotricina por otro de resistencia a kanamicina y se incorporó la secuenciaespaciadora del gRNA. Por PCR y secuenciación se confirmó la inserción de una únicasecuencia espaciadora en la posición y dirección correcta. Por último, setrasformó establemente la var. Grand Rapids de lechuga. Se obtuvieron 8 eventosdiferentes, con una eficiencia del 6%, similar a la lograda previamente conotros vectores.