Desarrollo de nanoanticuerpos contra la proteína mayoritaria del viroplasma P9-1 del virus del Mal de Río Cuarto: aplicaciones en ensayos de ELISA sándwich e inmunodetección.

MONTI, DEMIÁN; DUMÓN, ANALÍA DELINA; MUYLDERMANS, SERGE; LLAUGER, GABRIELA; ADURIZ, MATÍAS; MATTIO, MARÍA FERNANDA; VINCKE, CÉCILE; DEL VAS, MARIANA; ROMAO, EMA; WIGDOROVITZ, ANDRÉS; PARREÑO, VIVIANA

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Virología; 2021

Sociedad Argentina de Virologia

El virus Mal de Río Cuarto (MRCV) es un miembro del género Fijivirus de la familia Reoviridae que causa una enfermedad devastadora en el maíz y se transmite de manera persistente y propagativa por insectos vectores. La replicación y el ensamblado del virus ocurre en viroplasmas que están formados por proteínas virales y del hospedante. Este trabajo describe el aislamiento y caracterización de nanoanticuerpos derivados de llama (Nbs) que reconocen el principal componente de viroplasma viral, la proteína no-estructural P9-1. Se seleccionaron Nbs específicos contra P9-1 recombinante, que presentaron afinidades en el orden nanomolar medidas por resonancia de superficie de plasmones. Los tres Nbs seleccionados se fusionaron a fosfatasa alcalina y a GFP para desarrollar un ensayo de ELISA tipo sándwich que detectó la presencia del virus en extractos de hojas infectadas con una alta sensibilidad (99,12%, IC del 95%: 95,21 - 99,98) y especificidad (100%, IC del 95%: 96,31 - 100) diagnósticas y un límite de detección de 0,236 ng/ml. Además, ensayos preliminares indicaron que el ELISA desarrollado es capaz de detectar al virus en extractos de chicharritas vectoras. De manera relevante, estos nanoanticuerpos reconocieron diferentes conformaciones de P9-1 y se emplearon con éxito para detectar P9-1 en ensayos de coinmunoprecipitación a partir de extractos de hojas de maíz infectado. Finalmente, demostramos que las fusiones de los Nbs con GFP y RFP permitieron la inmunodetección del virus presente en las células del floema de secciones delgadas de hojas infectadas. Los Nbs desarrollados en este trabajo constituyen una herramienta versátil y novedosa para asistir al estudio de la epidemiología del MRCV y a los programas de mejoramiento de maíz, y contribuirán al impulso de investigaciones futuras sobre la estructura y maduración del viroplasma.