Estudio comparativo de la susceptibilidad al estrés ácido, oxidativo y sobrevida en macrófagos en aislamientos de Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis

CUERDA, MARÍA XIMENA; SANTANGELO, MARÍA DE LA PAZ; BERNÁ, LUISA; ROMANO, MARÍA ISABEL; COLOMBATTI OLIVIERI, M. ALEJANDRA; ALVARADO PINEDO, MARÍA FIORELLA

La Plata

Congreso; I congreso de microbiologia veterinaria; 2021

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) es el agente causal de la paratuberculosis. Poco se conoce sobre los factores de virulencia en este patógeno. En un trabajo previo seleccionamos tres cepas, aisladas a partir de bovinos en Argentina, con diferente grado de virulencia en un modelo murino. Realizamos un estudio de genómica comparativa y detectamos una inserción de 12pb en gen Map_0403 en la cepa de alta virulencia Map 1347. La proteína Map_0403 es homologa a Rv3671c que está bien caracterizada en Mycobacterium tuberculosis fue asociada a protección del estrés ácido y oxidativo que encuentra dentro de los fagosomas en los macrófagos. Para demostrar el rol de Map_0403 en Map, y si la mutación encontrada afecta de alguna manera la virulencia, se realizaron ensayos de infección de macrófagos derivados de monocitos bovinos (MDMB) y resistencia a pH ácido y H2O2.Se utilizaron las cepas 1347 (alta virulencia), 6611 (alta-mediana virulencia), 1547 (baja virulencia) y la cepa de referencia K-10 (baja virulencia). Se realizaron 2 ensayos de infección de MDMB provenientes de diferentes animales utilizando una multiplicidad de infección (MOI) de 10:1, y se evaluó la sobrevida de Map a los 2, 4 y 6 días post-infección. Por otro lado se cultivaron a pH 7 y pH 4.5 por 6, 12, 30 y 75 días; y se evaluó la sensibilidad a diferentes concentraciones de H2O2 (0, 5, 20 y 50mM) por 3hs de exposición.Se observo que las cepas 1347 y 6611 fueron las que tuvieron mayor sobrevida en MDMB y las que tuvieron mayor resistencia al H2O2. Con respecto al pH acido, la cepa 6611 fue la que mostro mayor sensibilidad.La inserción en el gen Map_0403 en la cepa 1347 no afecto la susceptibilidad al estrés ácido y oxidativo, ni a la sobrevida en MDMB. Se requieren más estudios para evaluar el rol de este gen en la virulencia de Map