Respuesta inmune frente a antígenos recombinantes en bovinos experimentalmente infectados con micobacterias ambientales

MORSELLA C,; EIRIN ME; FIORENTINO, ANDREA; VASINI ROSELL B.,; PAOLICCHI FA; BRESKY F,; MENDEZ ML,; ZUMÁRRAGA MARTÍN JOSÉ

San Carlos de Bariloche

Congreso; XXIII Reunión Científico Técnica y 1° Virtual Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico; 2021

AAVLD

Introducción. La prueba oficial de diagnóstico para la tuberculosis bovina (TB) es la intradermorreacción, la cual consiste en la inoculación intradérmica de un derivado proteico purificado de la cepa de Mycobacterium bovis AN5 (PPDb) y en la posterior medición de la reacción de hipersensibilidad retardada producida luego de las 72 h de su inoculación. Existe otra prueba, el ensayo de gamma interferón (γIFN), que permite identificar animales sensibilizados luego de la estimulación de linfocitos con PPDb o antígenos específicos de M. bovis. El PPDb es una mezcla compleja, principalmente de proteínas y lípidos que puede inducir reactividad cruzada con proteínas codificadas en el genoma de micobacterias ambientales (MA). Así, los animales no infectados con M. bovis que se encuentren sensibilizados por una exposición previa a las MA también podrían reaccionar al PPDb, dando como resultado un diagnóstico falso positivo. El uso de proteínas ausentes en la mayoría de las MA en las pruebas de diagnóstico mejoraría la especificidad en la detección de M. bovis. El objetivo del trabajo consistió en evaluar la respuesta inmune mediada por células utilizando antígenos específicos para el diagnóstico de M. bovis, en bovinos desafiados experimentalmente con tres especies de MA. Materiales y métodos. Para el desafío se utilizaron tres cepas de MA: Mycobacterium phlei, Mycobacterium porcinum y Mycobacterium fortuitum. Las dos primeras se aislaron de carcasas bovinas con lesiones detectadas en frigorífico1 y la última de una muestra de leche de tanque de enfriado de tambo2. La caracterización molecular de los aislamientos se realizó mediante la secuenciación del gen que codifica la subunidad ribosomal 16S. Para el ensayo experimental se seleccionaron 20 terneros Aberdeen Angus, de 3 a 4 meses de edad, negativos a TB y Paratuberculosis, los cuales fueron divididos en 4 grupos. El G1 (n=5) se infectó con M. phlei, el G2 (n=5) con M. porcinum, el G3 (n=5) con M. fortuitum y el G4 (n=5) grupo control sin infectar (inoculado con PBS 1X estéril). La infección experimental se realizó por vía oral, con 1x1010 UFC de cada cepa en dos tiempos con un intervalo de 7 días. Se tomaron muestras de sangre heparinizada por punción yugular de todos los animales el día de la inoculación (día 0) y cada 14 días hasta los 3 meses del comienzo del ensayo. La determinación de γIFN se realizó con un kit comercial (D screen® ruminant IFN-γ, IDVet, Francia) siguiendo las instrucciones del fabricante. La estimulación de la sangre se realizó con el PPDb y PPD aviar (PPDa) (4 μg/mL) provistos por el Kit y con antígenos recombinantes: Mb2845c3 y ESAT6CFP10 (10 μg/mL) (Lionex, GmbH, Alemania). Se realizó la lectura de a 450 nm en un lector de ELISA (Thermo Labsystems®; Model 352), en términos de densidad óptica (DO). El análisis estadístico se llevó a cabo mediante un modelo lineal mixto, con mediciones repetidas en el tiempo (SAS/STAT® 9.2). El ensayo experimental fue aprobado por el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Experimentación ?INTA/CeRBAS (Resolución 072/2016). Resultados. En todos los grupos inoculados se observó respuesta inmune detectable frente a los antígenos estudiadossiendo significativa (p