DELECIÓN DE LOS GENES LPRG Y P55 DE MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS AFECTAN SU CAPACIDAD INFECTIVA EN MACRÓFAGOS BOVINOS.

NAGEL, ARIEL; MOYANO, ROBERTO DAMIAN; SABIO Y GARCÍA, JULIA; ALONSO, NATALIA; COLOMBATTI OLIVIERI, MARIA ALEJANDRA; ROMANO, MARIA ISABEL

General Pico, La Pampa

Jornada; XIII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria - I Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria; 2021

UNLPam y Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria (SOMEVE)

La paratuberculosis (PTB) es una enteritis granulomatosa producida por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Afecta principalmente a rumiantes, produciendo grandes pérdidas económicas. La dificultad de controlar la PTB, ponen de relieve la urgente necesidad de mejorar los métodos de diagnóstico, así como encontrar nuevas vacunas eficaces contra PTB. Para ello, es necesario conocer factores de Map asociados a la virulencia y los mecanismos de estas micobacterias de evadir la respuesta inmune en el macrófago bovino.En este trabajo se busca establecer la capacidad infectiva y la localización subcelular en macrófagos bovinos derivados de monocitos (BMDMs) de cepas mutantes de Map. Se seleccionaron los genes lprG y p55 ya caracterizados en el complejo tuberculosis y en M. avium subsp. avium. El LprG Interviene en el ensamblaje o transporte de glicolípidos (LAM, PDIM), y el P55 es una bomba de eflujo relacionada a resistencia a antimicrobianos y que contribuye en el transporte de lípidos. Se utilizaron mutantes de una cepa de referencia de Map (K10) y un aislamiento local (6611) de importancia vacunal.Los BMDMs se infectaron con una multiplicidad de infección de 5:1, de bacterias previamente marcadas con FITC durante 2 horas a 37°C y 5% de CO2. Luego de fijar a las células, se marcaron por inmunofluorescencia indirecta los endosomas/fagosomas tardíos (LAMP-3), endosomas tempranos (Rab-5) y cuerpos acídicos (Lysotracker Red) para observar al microscopio confocal.Con respecto a la cepa K10, las mutantes simple (ΔlprG) y doble (ΔlprG-p55) colocalizaron con endosomas tardíos, mientras que la cepa salvaje colocalizó con endosomas tempranos. En cuanto a la cepa 6611, las mutantes ΔlprG-p55 colocalizaron tanto con endosomas tardíos como con cuerpos acídicos de forma significativamente mayor a la cepa salvaje. Estos resultados sugerirían una menor capacidad de las mutantes para evadir la maquinaria fagocítica del macrófago siendo congruente con su menor virulencia.