IVIT   27842
INSTITUTO DE VIROLOGIA E INNOVACIONES TECNOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un vector adenoviral optimizado como candidato vacunal contra la fiebre aftosa
Autor/es:
SEKI, CRISTINA; ROBIOLO, BLANCA; D'ANTUONO, ALEJANDRA; ZIRALDO, MICAELA; PERIOLO, OSVALDO; ZAMORANO, PATRICIA; BIDART, JUAN; DE VICENZO, CARMEN; MATTION, NORA
Lugar:
Ciudad Autonoma de Buenos Aires
Reunión:
Jornada; Jornada de Jóvenes Investigadores 2019.; 2019
Institución organizadora:
Facultad de Veterinaria (UBA)
Resumen:
La fiebre aftosa (FA) es una enfermedad causada por el virus de la Fiebre Aftosa (VFA), que afecta a especies de interés pecuario. Dada las graves implicaciones comerciales para el país afectado, la FA es considerada por la Organización Mundial de Sanidad Animal como la principal enfermedad animal de declaración obligatoria. Amplia evidencia internacional sustenta la necesidad de desarrollar candidatos vacunales que induzcan una respuesta inmune eficaz y duradera contra los diferentes serotipos del VFA y que no estén basados en el cultivo del VFA infectivo. Una estrategia que ha demostrado ser exitosa es el empleo de plataformas basadas en el adenovirus recombinante humano tipo 5 (Ad). Nuestro laboratorio generó el Ad-P12A3C que dirige la expresión de las proteínas estructurales y la proteasa viral 3C del VFA cepa O1 Campos. La inmunización con este candidato, en modelo murino, no protegió a los animales frente al desafío viral. El objetivo de este trabajo es optimizar estos vectores adenovirales para que induzcan inmunidad protectora, al menos contra el desafío homólogo, como ocurre con la vacuna inactivada de uso actual. Con este fin se generó el vector Ad-P12A3COP con el objetivo de expresar mayores niveles de subunidades del VFA O1Campos. El nuevo candidato contiene la unidad transcripcional heteróloga (cassette P12A3C) insertada en sentido opuesto respecto al genoma adenoviral y bajo el control del promotor CMV optimizado. Por medio de análisis por Western blot y ELISA se determinó que los niveles de acumulación de proteínas del VFA, en extractos citoplasmáticos totales de células HEK293A infectadas con el vector modificado Ad-P12A3COP, fueron 15 veces superiores respecto a aquellas infectadas con el vector anterior Ad-P12A3C. Las subunidades del VFA generadas fueron reconocidas por un panel de sueros de bovinos vacunados, sugiriendo que los determinantes antigénicos se expondrían en una conformación similar a la del virus nativo. El vector Ad-P12A3COP se evaluó en pruebas de inmunogenicidad y desafío en un modelo murino. Los resultados obtenidos demostraron que ratones inoculados con dos dosis de Ad-P12A3COP alcanzaron un título de anticuerpos específicos 10 veces superior al del grupo inoculado con Ad-P12A3C. Más aún, el 70% de los ratones inoculados con el vector Ad-P12A3COP fueron protegidos ante el desafío viral homólogo. En conclusión, las modificaciones introducidas, inversión del cassette heterólogo que codifica las proteínas del VFA y la optimización del promotor, permitieron en esta primera etapa, desarrollar un vector capaz de aumentar significativamente el nivel de expresión de las proteínas virales capsidales, resultando ser un candidato vacunal más inmunogénico y capaz de aportar protección frente al desafío con virus vivo de la cepa O1 Campos, en un modelo murino