Estudio de la composición peptídica del tegumento de Anfibios Leptodactílidos del nordeste argentino mediante técnicas de Biología Molecular para su potencial aplicación como antimicrobianos

CUZZIOL BOCCIONI A.P.; MARANI MARIELA M.; BASSO NÉSTOR G.; CANCELARICH NATALIA L.; AGUILAR S.

Corrientes

Otro; XXV Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas; 2019

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura, Universidad Nacional del Nordeste

La piel de los anfibios representa una diversa fuente de péptidos antimicrobianos. Estos compuestos forman parte de la defensa de organismos contra una amplia variedad de patógenos. Los PAMs presentes en la secreción cutánea de anfibios son sintetizados y procesados a partir de la traducción de ARNm característicos que contienen dos regiones altamente conservadas (péptido señal y región acídica) y una región de péptido activo que puede ser altamente variable. Las regiones conservadas se observan entre especies pertenecientes a diferentes géneros y en las pertenecientes a distintas familias. Si bien muchas especies de anuros han sido estudiadas globalmente por su potencial uso antimicrobiano en la industria farmacéutica, la mayor parte de las especies del Nordeste argentino aún no han sido exploradas. El objetivo de este trabajo fue identificar la presencia de biomoléculas de potencial actividad antimicrobiana en el tegumento de anfibios del Nordeste argentino de la familia Leptodactylidae. Para ello se extrajo el ARN total del tegumento de ejemplares de Leptodactylus chaquensis, L. latrans y Physalaemus albonotatus con el método de lisis del TRIzol. Se seleccionaron los fragmentos de interés a partir de un primer oligo (dT)-adaptador para la síntesis de ADNc, y primers degenerados para su amplificación basados en secuencias de péptidos señal conservados. Los productos de PCR obtenidos fueron ligados a vectores, y se incorporaron a células bacterianas competentes para su clonación. Posterior a la selección y crecimiento de las colonias bacterianas, los fragmentos de interés dentro de los plásmidos de las colonias seleccionadas a partir de los cultivos bacterianos fueron amplificados por PCR y purificados para secuenciar. A partir del análisis de los geles electroforéticos, se seleccionaron aquellos insertos considerados de tamaño esperado para las secuencias de precursores peptídicos antimicrobianos (aquellos entre 280 y 400 pb). Las muestras fueron enviadas para su secuenciación y, a la fecha, se ha obtenido una única secuencia aminoacídica (de P. albonotatus) coincidente con la estructura típica tripartita de los prepro-péptidos (región señal, región acida, y secuencia aminoacídica). Los favorables resultados de la secuenciación permitirán continuar con la bioprospección de los compuestos en estudio, a través del análisis in silico y la posterior síntesis química de los fragmentos de interés para la evaluación de la actividad antimicrobiana.