INVESTIGADORES
MARANI Mariela Mirta
congresos y reuniones científicas
Título:
Biosensor de resonancia plasmática de superficie para evaluar la afinidad de rhEPO por péptidos de bibliotecas combinatorias
Autor/es:
MARTÍNEZ CERON MARÍA C.; TAULÉS MARTA; MARANI MARIELA M.; ETCHEVERRYGARAY MARINA; ALBERICIO FERNANDO; CASCONE OSVALDO; CAMPERI SILVIA A.
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires, ARGENTINA
Reunión:
Jornada; Herramientas modernas para el estudio de aspectos estructurales de proteínas; 2009
Institución organizadora:
Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica
Resumen:
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Con el objeto de desarrollar una matriz cromatográfica
de afinidad para purificar la eritropoyetina recombinante humana (rhEPO) en un
solo paso, se identificaron ligandos para la misma por el screening de bibliotecas combinatorias peptídicas del tipo una
bolilla un péptido. Para la evaluación de la afinidad por rhEPO de los
péptidos seleccionados se utilizó un biosensoar de resonancia plasmática de
superficie Biacore T100, herramienta sofisticada para medir la interacción
entre moléculas.
Se sintetizó una biblioteca combinatoria de
octapéptidos por el método de dividir-acoplar-recombinar, que permite obtener
una única entidad peptídica por bolilla de resina. Para el screening se puso en
contacto la biblioteca con rhEPO conjugada con el colorante fluorescente Texas
Red. Se aislaron las bolillas fluorescentes y los péptidos de las bolillas seleccionadas
se secuenciaron por tandem MALDI-TOF MS.
Para analizar la afinidad de los péptidos resultantes
del screening se marcó la rhEPO con biotina y se la inmovilizó con un chip de
streptavidina.
Para abaratar el análisis teniendo en cuenta los costos
de los chips, se inmovilizó la rhEPO en ligar de cada péptido. Se hallaron
péptidos con afinidad por rhEPO en el rango de Kd de 10-5 - 10-6
M, que serán luego sintetizados en mayor escala para ser inmovilizados y
evaluarlos como candidatos para purificación de rhEPO por cromatografía de
afinidad.
