INVESTIGADORES
CHALON Miriam Carolina
congresos y reuniones científicas
Título:
NISINA EN COMBINACIÓN CON EDTA CONTRA PATÓGENOS CONTAMINANTES DE ALIMENTOS
Autor/es:
LANZA, L; CHALON M.C.; BELLOMIO, A
Lugar:
San Miguel de Tucuman
Reunión:
Jornada; III Jornadas de Microbiologia de Tematicas especificas del NOA; 2019
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Las bacteriocinas son compuestos antibacterianos, que constituyen un subgrupo heterólogo de péptidos sintetizado ribosómicamente por bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Estos péptidos son capaces de inhibir el crecimiento de otros microorganismos indeseables. Las bacteriocinas se han aplicado para prevenir el crecimiento de bacterias patógenas en distintas áreas ya sea como conservantes naturales en la industria alimenticia, en la industria farmacéutica y en veterinaria. La nisina es una bacteriocina del grupo I (lantibioticos) producida por Lactococcus lactis. Posee una potente actividad antimicrobiana contra bacterias Gram-positivas, sin embargo, no es activa contra bacterias Gram-negativas debido a que no es capaz de atravesar la membrana externa de estos microorganismos. Ciertos tratamientos que pueden alterar la membrana externa de las bacterias de Gram-negativas, permiten que nisina alcance la membrana interna y sea activa. El objetivo de este trabajo fue mejorar la purificación de nisina a partir de las preparaciones comerciales y evaluar su actividad contra los patógenos transmitidos por los alimentos Gram-negativos. TECNIS® (preparación comercial de nisina al 2.5%) se suspendió en agua y se agitó a temperatura ambiente antes de agregar diclorometano. Instantáneamente, se formó un precipitado blanco en la interfaz de la capa acuosa amarilla y la capa orgánica incolora. La emulsión obtenida se centrifugó, después de lo cual la fracción de nisina deseada formó un sedimento sólido marrón en la interfaz de ambas capas. El sedimento se secó para eliminar cualquier disolvente residual. El extracto de nisina se disolvió posteriormente en agua, seguido de filtración. Esta solución se purificó adicionalmente por RP-HPLC en una columna preparativa C18. Las fracciones eluidas se secaron al vacío y se almacenaron a -20ºC. La pureza se verificó con un sistema analítico de RP-HPLC. La actividad de la nisina se evaluó frente a patógenos transmitidos por alimentos Gram-negativos en medios líquidos y sólidos, utilizando EDTA como agente quelante (0.625 y 2.5 mM para Escherichia coli O157 y Salmonella enterica serovar Typhimurium 14028, respectivamente). Listeria monocytogenes se empleó como control positivo de actividad. Como resultado se obtuvo nisina pura como un polvo marrón y se determinaron las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) en medio sólido y liquido contra L. monocytogenes FBUNT, S. Typhimurium 14028 y E. coli O157. La CIM se definió como la concentración más baja de nisina que no produce crecimiento microbiano visible. Por lo tanto, en este trabajo describimos un protocolo eficiente para la purificación de nisina que nos permite obtener el péptido enriquecido a partir de preparaciones comerciales que contiene solo el 2.5% del péptido deseado, con alta actividad antimicrobiana contra patógenos Gram-negativos transmitidos por alimentos.