EL NIVEL DE TUBULINA DE MEMBRANA EN ERITROCITOS HUMANOS AFECTA LA DISTRIBUCIÓN ASIMÉTRICA DE FOSFATIDILSERINA

BALACH, M. M.; CAMPETELLI, A.N.; SANTANDER, V. E.; MONESTEROLO, N.

Córdoba

Congreso; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Los fosfolípidos de las membranas biológicas se encuentran distribuidos de forma asimétrica. Esta distribución tiene importantes funciones a nivel celular. Esta asimetría es generada y mantenida por escramblasas, flopasas y flipasas. Mientras las flopasas expulsan fosfolípidos desde el lado interno al externo de la membrana, las flipasas lo hacen en el sentido inverso. Si bien, ambas son ATPasas, las flipasas pertenecen a la familia de las P4-ATPasas. Algunas P-ATPasas, como NKA y PMCA, están reguladas por tubulina. En eritrocitos de personas diabéticas e hipertensas, la tubulina asociada a la membrana se encuentra aumentada con respecto a eritrocitos de personas sanas (control), este aumento de tubulina produce inhibición parcial de la actividad de NKA, PMCA. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la tubulina sobre la actividad flipasa en membrana plasmática de eritrocitos de pacientes diabéticos e hipertensos y establecer una relación con el contenido de tubulina en la membrana de estas células.En nuestros experimentos, utilizamos el análogo fluorescente de fosfatidilserina (PS) NBD-PS y eritrocitos de pacientes diabéticos e hipertensos, o eritrocitos normales en donde la cantidad de tubulina de membrana se modificó farmacológicamente. La distribución de NBD-PS en la membrana fue determinada por citometría de flujo.Los resultados mostraron que eritrocitos hipertensos y diabéticos exponen un 10 % más de NBD-PS que los eritrocitos normales. La incubación de eritrocitos normales con taxol, que induce la asociación de tubulina a la membrana, resultó en una disminución del 50% en la traslocación de NBD-PS con respecto al control. Por el contrario, en células donde la cantidad de tubulina asociada a la membrana está disminuida (Nocodazol), el porcentaje de NBD-PS traslocado fue mayor que en el control. Esta regulación por parte de tubulina también fue observada en células K562 eritropoyéticas. Para determinar si las variaciones en la traslocación de NBD-PS mediadas por tubulina se debían a una inhibición de flipasas, o a una activación de flopasas, utilizamos el inhibidor irreversible de P-ATPasas, o-vanadato. Los eritrocitos incubados con o-vanadato exponen mayor cantidad de PS, independientemente de la cantidad de tubulina que posean asociados a la membrana, corroborando así que el efecto observado en los experimentos anteriores se debe a la regulación de la flipasa, no de las flopasas. Una disminución de la actividad flipasa resultaría en un aumento de la exposición de PS, para corroborar esta hipótesis, se usó Anexin V-PE, la cual se une específicamente a la PS endógena ubicada en la cara externa de la membrana de células intactas, los eritrocitos de pacientes hipertensos y diabéticos muestran mayor exposición de PS en el lado extracelular con respecto a eritrocitos control.Los resultados presentados sugieren que en la membrana plasmática de los eritrocitos existe una relación entre el contenido de tubulina en la membrana y la distribución asimétrica de PS. Esto podría darle a la tubulina un nuevo rol en la biología celular, que es de regulador de la asimetría de los fosfolípidos en la membrana plasmática.