ENCAPSULACIÓN DE BRADYRHUZOBIUM SP. Y AZOSPIRILLUM BRASILENSE EN UNA MATRÍZ POLIMÉRICA DE ALGINATO MANTIENE LA VIABLIDAD CELULAR DURANTE EL ALMACENADO Y LA LIBERACIÓN GRADUAL

PAULUCCI N.S; EDITH INÉS YSLAS; CESARI A.B; DARDANELLI, MS

córdoba

Congreso; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

ENCAPSULACIÓN DE BRADYRHUZOBIUM SP. Y AZOSPIRILLUM BRASILENSE EN UNA MATRÍZ POLIMÉRICA DE ALGINATO MANTIENE LA VIABLIDAD CELULAR DURANTE EL ALMACENADO Y LA LIBERACIÓN GRADUALCesari AB1, Paulucci NS1, Yslas EI2 Dardanelli MS1.Dpto. de Biología Molecular, FCEFQyN, Universidad Nacional de Río Cuarto. 1INBIAS, CONICET - 2IITEMA, CONICET. E.mail: acesari@exa.unrc.edu.arEl éxito de los inoculantes microbianos en el suelo requiere de la supervivencia de un número de células que puedan llegar a un hábitat adecuado. Los inoculantes convencionales no garantizan una alta viabilidad de las células durante el almacenamiento y aplicación. Por el contrario, la encapsulación de microorganismos es una técnica novedosa y eficiente, que tiende a estabilizar las células, proporcionando menor exposición a factores estresantes abiótico y biótico y mejorar su viabilidad durante el almacenamiento y sobrevida en el suelo. El objetivo de nuestro trabajo es encapsular Bradyrhizobium sp. SEMIA6144 y Azospirillum brasilense Az39 en una matriz polimérica biodegradable a fin de incrementar la supervivencia durante el almacenamiento y lograr una liberación gradual de los microorganismos entrampados. SEMIA6144 y Az39 fueron crecidos en medio YEM y LB respectivamente a 28°C. La encapsulación de los microorganismos se realizó con alginato de sodio empleando la técnica descripta por Schoebitz y Belchi (2016). Las perlas obtenidas fueron almacenadas durante un año a 4° C. Periódicamente, se realizó el recuento de microorganismos en el interior de las perlas según He y col (2016). Para diferenciar las células vivas de las muertas se realizó la tinción LIVE/DEAD®. La actividad metabólica de las bacterias encapsuladas se analizó por reducción de MTT (Patel y col, 2013). La cinética de liberación de los microorganismos desde las perlas fue analizada en solución fisiológica y en exudados radicales de maní. Nuestros resultados mostraron una encapsulación de 107 UFC/perla (1mm de diámetro), tanto para SEMIA6144 como para Az39. Durante el periodo de almacenamiento, respecto a las perlas conteniendo SEMIA6144 la viabilidad de las bacterias disminuyó a 105 UFC/perla a los 300 días y a 102 UFC/perla a los 350 días. Respecto a las perlas conteniendo Az39, la viabilidad de las bacterias disminuyó a 103 UFC/perla a los 300 días, mientras que a 350 días no se registraron células cultivables. No obstante la disminución en el recuento de bacterias luego de los 300 días de almacenamiento, la tinción LIVE/DEAD demostró que el porcentaje de bacterias vivas fue de un 63% para SEMIA6144 y de un 25% para Az39. La medida de MTT arrojó una DO de 0,03 indicando que las bacterias presentaron un estado metabólico basal durante el periodo analizado. La liberación de ambas bacterias al medio durante 10 días resultó mayor en exudados radicales que en solución fisiológica (105 UFC/perla, y 103 UFC/perla respectivamente). Nuestros resultados nos permiten concluir que la encapsulación en una matriz de alginato permitió mantener la supervivencia de las células a 4°C durante 300 días en un estado metabólico basal. A pesar de los bajos recuentos, nuestros resultados dan indicios de una inducción del estado de viables no cultivables en el interior de las cápsulas. Los microorganismos entrampados son liberados desde las perlas en forma gradual en el tiempo y en respuesta a la presencia de exudados radicales de maní.