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Los microorganismos naturalmente conforman comunidades polimicrobianas encerradas en una matriz polimérica de exopolisacáridos (EPS), denominadas biofilms. Esta forma de vida es un mecanismo de supervivencia que les permite adaptarse y protegerse de los entornos hostiles, los antimicrobianos y los mecanismos de defensa del sistema inmune de los organismos huéspedes. Así, los biofilms generan infecciones que derivan en enfermedades graves, persistentes y/o crónicas, lo cual conduce a estadías hospitalarias prolongadas, con mayores costos y alta mortalidad. Estas amenazas para la salud mundial han estimulado el interés en el desarrollo de fármacos y terapias antimicrobianas eficaces con los principales objetivos enfocados en esta problemática. La Inactivación fotodinámica (PDI) utiliza un fotosensibilizador (PS) y luz para producir especies reactivas de oxígeno en condiciones aeróbicas, las cuales dañan los componentes celulares, provocando la muerte de los microorganismos. En el presente trabajo se determinó la acción fotodinámica de 5,10,15,20-tetra(4-N,N,N-trimetilamoniofenil)porfirina (TMAP4+) en la PDI de biofilms de la bacteria Gram positiva Staphylococcus aureus y de la Gram negativa Escherichia coli, a través de diferentes métodos de cuantificación. En primer lugar se investigó la técnica de recuento en placa, la cual permitió determinar el número de bacterias viables post-tratamiento. Los resultados obtenidos demostraron que la PDI es más efectiva en S. aureus que en E. coli, y que el efecto fotodinámico acrecienta al aumentar el tiempo de irradiación. El ensayo de cristal violeta no mostró diferencias significativas entre los cultivos pre- y post-tratamiento de ambas bacterias, ya que este colorante tiñe tanto a células vivas como muertas y también a la matriz de EPS, determinando la biomasa total del biofilm. Por otro lado, el uso de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) permitió realizar la cuantificación de las células metabólicamente activas presentes en el biofilm luego de la PDI. Este método demostró que se produjo una disminución en la cantidad de células viables a medida que se incrementó el tiempo de exposición a la luz. Finalmente, la tinción con azul de 1,9-dimetil metileno (DMMB) posibilitó la cuantificación de polisacáridos sulfatados que forman parte de la matriz que rodea a las células del biofilm. Este ensayo permitió observar que a medida que aumenta el tiempo de irradiación, la cantidad de matriz presente en el biofilm disminuye. Este efecto se presentó en ambas cepas, siendo más evidente en S. aureus. El aumento en el conocimiento sobre el blanco de la acción fotodinámica en biofilms (biomasa, viabilidad celular y/o matriz) permite diseñar estrategias de control más específicas para su eficiente erradicación.