“Participación de las cascadas de MAP quinasas en la proliferación de células intestinales inducida por ATP”.

BUZZI NATALIA; BOLAND RICARDO; RUSSO DE BOLAND ANA

Universidad Nacional del Sur

Jornada; Primeras Jornadas Bioquímicas del Sudoeste Bonaerense “Desde lo molecular a la clínica”.; 2009

Universidad Nacional del Sur

PARTICIPACIÓN DE LAS CASCADAS DE MAP QUINASAS EN LA PROLIFERACIÓN DE CÉLULAS INTESTINALES INDUCIDA POR ATP BUZZI N, BOLAND R, RUSSO DE BOLAND A. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional del Sur. 8000 Bahía Blanca, Argentina. E-mail: aboland@criba.edu.ar En el presente trabajo se evalúa el rol del ATP en la activación de las quinasas activadas por mitógenos (MAPKs) ERK1/2, JNK1/2 y p38, su participación en la modulación de factores de transcripción y en la proliferación de las células intestinales Caco-2. Análisis por western blot demuestran que el ATP induce la fosforilación de las MAPKs de manera tiempo y dosis dependiente. Efecto también observado en presencia UTP, UDP y ATPS, pero no con ADP y ADPβS, sugiriendo la participación de los receptores P2Y2, P2Y4 y P2Y6 en el mecanismo de activación. Estudios de RT-PCR y la secuenciación de sus productos confirman la expresión de P2Y2 y P2Y4 en estas células. Mediciones espectrofluorimétricas muestran que el ATP provoca un aumento de calcio intracelular. Más aún, la fosforilación de las MAPKs depende tanto del influjo como de la liberación de calcio de depósitos intracelulares, de la activación de la familia c-Src tirosina quinasa, y parcialmente de las vías AMPc/PKA y PKC. Además el inhibidor específico del receptor del factor de crecimiento epidermal (EGFR), AG1478, disminuyó la fosforilación de las MAPKs, sugiriendo que su transactivación por el ATP, participa en la estimulación de estas quinasas. Por microscopía confocal se observó en células estimuladas, la translocación de las MAPKs al núcleo, donde fosforilan a los factores de transcripción ATF-1, ATF-2 y JunD e inducen la expresión de c-Fos y miembros de la familia Jun. Además las MAPKs participan en la inducción y fosforilación de la fosfatasa dual MKP-1, capaz de inactivar a ERK, JNK y p38. Finalmente se observó que el ATP, vía las MAPKs estimula la proliferación de las células Caco-2. Estos resultados proveen nuevas bases moleculares para el mejor entendimiento de las funciones del ATP como transductor de señales y activador de las MAPKs en estas células derivadas de adenocarcinoma de colon humano.