Aislamiento de microorganismos degradadores de glifosato en suelos con y sin historia de exposición al herbicida.

CARNÉ. IGNACIO; VIASSOLO, RODRIGO; ZABALOY, MARÍA CELINA; GOMEZ, ELENA V

Rosario

Jornada; VI Jornada de Ciencia y Tecnología de la Universidad Nacional de Rosario; 2012

Universidad Nacional de Rosario

El control de malezas en cultivos genéticamente modificados resistentes al glifosato (Gf) y el barbecho químico previo a la siembra de trigo son los principales promotores del uso creciente de este herbicida, lo que supone un potencial riesgo para el medio ambiente. El Gf es un compuesto organofosforado con un enlace C-P químicamente estable que inhibe la enzima 5-enolpiruvil shikimato 3-fosfato sintasa (EPSPS), indispensable para la síntesis, entre otros, de aminoácidos aromáticos en algunos organismos. Algunos microorganismos del suelo participan en la atenuación del impacto de xenobióticos mediante mineralización o co-metabolismo. Se planteó como objetivo la obtención de aislamientos de microorganismos degradadores de Gf puro en muestras de suelo provenientes de Colonia Napostá (Bs. As.) y de Zavalla (Santa Fe), con diferentes historias de exposición al herbicida. A tal fin se realizó, para cada suelo, un cultivo de enriquecimiento en medio líquido (MA) compuesto por sales minerales y suplementado con extracto de levadura y Gf puro (1 mM). Los suelos (5 g) se suspendieron en erlenmeyers con 50 ml de MA y se incubaron a 30 ºC por 7 días. Se transfirieron alícuotas de 1 ml a 50 ml del mismo medio y se incubaron de igual forma. Finalmente se sembraron 0,1 ml de éstos cultivos en MA + agar 1,8% y se incubaron a 30 ºC por 7-10 días obteniéndose 9 aislamientos. Dichos aislamientos fueron sembrados en medio triptona soja agar (TSA) en pico de flauta y conservados a 4 °C, ó sembrados en caldo triptona soja (TSB) y crio-preservados en glicerol 20% a -70 ºC. Hasta el momento se ha estudiado la capacidad de dos de los aislamientos para utilizar Gf puro a una concentración de 1 mM como fuente de carbono (C), fósforo (P) y como fuente de C y P, y se ha evaluado la tolerancia a concentraciones mayores (1.5; 3.0 y 10 mM). Las curvas de crecimiento fueron realizadas por mediciones de densidad óptica a 660 nm, en medio MA sin extracto de levadura y con el agregado de glucosa (1 g/L) cuando se estudió al Gf como fuente de P. Los resultados mostraron que el Gf no sería utilizado como fuente de C pero sí de P, cuando hay en el medio una fuente de C y energía como glucosa (1 g/L). A 10 mM se observó una diferencia significativa en el crecimiento en uno de los aislamientos, indicando una relativamente alta tolerancia al principio activo. Éste se ha identificado como Rhodococcus sp., a través de secuenciación casi completa del gen ARNr de 16S (1367 pb) y posterior comparación de la secuencia con las depositadas en el Genbank.