OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ANTICUERPOS DE DOMINIO ÚNICO DERIVADOS DE CAMÉLIDOS (NANOANTICUERPOS O VHH) ESPECÍFICOS CONTRA LA CEPA O1 CAMPOS DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA PARA APLICACIÓN DIAGNÓSTICA

BOZZO J; GRIPPO V; MARCHESE F; MATTION N

CABA

Jornada; IX JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES-FVET-UBA; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias-UBA

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado de graves repercusioneseconómicas. Existen siete serotipos del Virus de la FA (VFA): O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 y Asia1; habiendo los tres primeros circulado en Argentina. El desarrollo de herramientas diagnósticas innovadores que respondan a las necesidades de control de la FA es de gran interés debido a la elevada variabilidad que presenta el virus, la facilidad de contagio y la susceptibilidad de varias especies de interés económico. A su vez, los anticuerpos (Acs) de dominio único derivados de camélidos (denominados Nanoanticuerpos o VHH) representan una herramienta novedosa con características únicas en comparación con los Acs convencionales. Se caracterizan por su alta especificidad, estabilidad, afinidad por el blancoy reducido tamaño. Esto último permite fijar mayor densidad de Acs incrementandonotablemente la sensibilidad diagnóstica. Por esta razón, el presente trabajo tuvo como objetivo obtener, expresar y caracterizar preliminarmente VHH específicos contra la cepa O1/Campos (O1C) del VFA para su potencial aplicación en la innovación diagnóstica. Para lograr tal objetivo, se construyeron dos bibliotecas de Nanoanticuerpos en el vector fagémido pHEN4 a partir de la sangre total periférica de dos llamas (Lama glama) inmunizadas con la vacuna tetravalente (cepas O1/Campos, A24/Cruzeiro, A/Arg/2001 y C3/Indaial). Partiendode estas bibliotecas inmunes, se seleccionaron fagos que expresaron en su superficie VHH específicos contra la cepa O1C por la metodología de ?Phage Display?. Luego de dos rondas de selección, se obtuvieron 32 nanoanticuerpos que presentaron reactividad específica contra la cepa O1C en ELISA. Estos nanoanticuerpos no mostraron reactividad frente a las otras cepas del VFA presentes en la vacuna. Posteriormente, se estudió la diversidad de los 17nanoanticuerpos más reactivos obtenidos. Para esto, se amplificó el fragmentocorrespondiente a cada VHH por PCR y se digirió este producto de PCR con la enzima de restricción HinfI. Luego, se confirmó que 13 de estos 17 VHH eran únicos por secuenciación. Estos 13 nanoanticuerpos se expresaron como proteína soluble en bacteria (E. coli, cepa WK6) y su reactividad contra la cepa O1C se confirmó mediante ELISA y Western Blot (WB). En conclusión, obtuvimos 13 VHH diferentes que mostraron una alta reactividad contra la cepa O1C en ELISA. Aún más, estos nanoanticuerpos no reaccionaron contra las otras cepas de VFA (A24/Cruzeiro, A/Arg/2001 y C3/Indaial). Estos VHH representan una herramienta potencial para la caracterización de la cepa O1 Campos del VFA e innovación de métodos diagnósticos actuales en FA.