CEVHAN   27013
CENTRO DE VIROLOGIA HUMANA Y ANIMAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevas herramientas para el control de la fiebre aftosa
Autor/es:
ZIRALDO MICAELA; MATTION NORA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ; LOPEZ NORA; NUÑEZ DENISE; SPERAT WALTER; D'ANTUONO ALEJANDRA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Jornada; IX Jornadas Jóvenes Investigadores FVet UBA; 2019
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Veterinarias UBA
Resumen:
La Fiebre Aftosa (FA) es la enfermedad infecciosa más importante que afecta a especies de interés pecuario, y su agente etiológico es el virus de la fiebre aftosa (VFA). Brotes de FA en países previamente libres de la enfermedad han puesto de manifiesto la necesidad de desarrollar estrategias de control que puedan rápidamente inhibir o limitar la expansión de la enfermedad, complementando la vacunación en anillo y/o sistemática. El objetivo general deeste trabajo es desarrollar nanoanticuerpos (VHH) contra las proteínas no capsidales (PNC) del VFA, las cuales poseen determinantes antigénicos conservados que participan en interacciones homo o heterotípicas funcionalmente relevantes. La hipótesis de trabajo es que la interrupción de dichas interacciones mediante VHH específicos interferiría con la multiplicación viral. Para cumplir con el objetivo inicialmente se expresaron en forma soluble las proteínas no capsidales 3B, 3C y 3D del VFA O1Campos como fusiones a una etiqueta de histidina. Las proteínas purificadas por cromatografía de afinidad fueron inoculadas en una llama. Una vez verificada la respuesta inmune inducida contra cada uno de los antígenos, se construyó una biblioteca de VHH a partir de linfocitos en sangre total periférica del animal inmunizado. A partir de esta biblioteca inmune se obtuvieron mediante la metodología de Phage Display colecciones enriquecidas en bacteriófagos que expresan en su superficie VHHespecíficos contra las proteínas 3B, 3C y 3D del VFA. Para ello se realizaron 3 rondas de selección en placas multiwell sensibilizadas con cada una de las PNC (5μg/ml), en cada una de las cuales los bacteriófagos unidos a la proteína blanco fueron eluidos por clivaje con tripsina. Los bacteriófagos obtenidos en la primera ronda fueron amplificados y utilizados para dos rondas adicionales en condiciones idénticas a la anterior. En cada ronda se incluyó como control negativo a la proteína GST, siguiendo el mismo protocolo de incubación,lavado y elución. Así se logró un enriquecimiento en fagos específicos para 3B en al menos 10 veces respecto al control negativo. Por otro lado, para 3C y 3D se logró un enriquecimiento en fagos específicos en al menos 100 veces respecto al control negativo. Posteriormente, se determinó, por medio de un ensayo de ELISA, que un 53 % de un grupo de 100 clones elegidos al azar reconoció específicamente la proteína 3B. El porcentaje de clones positivos para las proteínas 3C y 3D fue de 67 y 78%, respectivamente. En conclusión, a partir de una biblioteca de nanoanticuerpos derivada de una llama inmunizada con las proteínas 3B, 3C y 3D de la cepa O1 Campos del VFA, se lograron seleccionar VHH específicos contra los antígenos de interés. Estos nanoreactivos constituyen importantes herramientas biotecnológicas que podrían ser aplicables al control de la FA, por ejemplo como antivirales aplicables a cepas emergentes no incluidas en la vacuna actual.